...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中,先将样品中核酸提取出来,或在原位,或将样品点在硝酸纤维素滤膜上,再经蛋白酶处理,或酶切成较小的片段,经变性处理(热或碱变性)成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针,也经变性成单链。根据...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中,先将样品中核酸提取出来,或在原位,或将样品点在硝酸纤维素滤膜上,再经蛋白酶处理,或酶切成较小的片段,经变性处理(热或碱变性)成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针,也经变性成单链。根据...
...DNA重组技术中对核酸的“精雕细刻”主要用酶作为工具。分子生物学研究过程中发现的酶,许多都用作工具,表20-列出最常用的几种工具酶。限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease)在重组DNA技术中有重要地位,在此较详细...
...根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术,免疫酶细胞化学技术,免疫铁蛋白技术,免疫金-银细胞化学技术,亲和免疫细胞化学技术,免疫电子显微镜技术等。近些年来,核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针,...
...stickier)。可与组织产生较高的非特异性结合,但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近,Wolf等(1987)建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子,这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”(oligoribo-...
...下面仅就国际上较常用的,有实用价值或发展前景的几种核酸标记方法及其显示方法分两方面简述如下。(一)核酸探针的常用酶促标记技术1.缺口平移 该技术由Kelly等于1970年创立。其原理是首先用DNA酶在双链DNA探针分子的一条链上制造一些缺口...
...光敏生物素的醋酸盐很易溶于水,与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点:方法简便易行,快速省时,不需昂贵的酶和dUTP等;只需光照,探针稳定,-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RNA,抗体和酶等的标记。在原位分子杂交,斑点杂交和...
...的新兴技术。尤其是近年来与PCR技术结合的原位PCR技术和原位免疫PCR技术敏感性很高。本书第十八至二十三章 对有关分子生物学基础理论、核酸分子探针制备、原位分子杂交技术、聚合酶链式反应(PCR)、核酸分子杂交电镜技术、杂交与免疫细胞化学双...
...探针制备就是目的基因的标记,核酸标记方法常用的有缺口平移法、随机引物法、末端标记法等。标记物质有放射性元素(如32P等)和非放射性物质(如生物素、地高辛等)。32P是最常用的核苷酸标记同位素,被标记的dNTP本身就带有磷酸基团,便于标记,...
...的新兴技术。尤其是近年来与PCR技术结合的原位PCR技术和原位免疫PCR技术敏感性很高。本书第十八至二十三章 对有关分子生物学基础理论、核酸分子探针制备、原位分子杂交技术、聚合酶链式反应(PCR)、核酸分子杂交电镜技术、杂交与免疫细胞化学双...
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