非同位素标记物很多例如：生物素（biotin），地高辛（Digoxigenin），汞（mercury），溴（bromine）和碱性磷酸酶等，其中目前应用最多的是生物素和地高辛。将此法与免疫组化PAP法或ABC法联合使用，能成功地显示一些神经肽mRNA和神经肽的共存与共同分布。向正华等发现碱性磷酸酶抗地高辛抗体是经 木瓜 蛋白酶处理的，只有抗体的Fab段没有F...
生物素- 补骨脂 素是另一种生物素光敏物质，在长波长紫外线照射下与嘧啶碱基发生光化学反应，加成到DNA中，去除小分子后，得到生物素标记核酸探针。此法可标记单链或双链DNA或RNA，及寡核苷酸。灵敏度与放射性探针相当。标记方法：取DNA或片段0.5μg加50μlTE（pH8.0）缓冲液中，再加入5μlg生物素- 补骨脂 素，溶解后，置365nm紫外光下直接照射...
...min；三蒸水补足体积至49μl，DNA聚合酶i 5u，混匀，14℃过夜，加0.5mmol/l ED-TA(Ph8.0)1μl终止反应。 已标记探针的提纯：10mg/ml tRNA 2μl,10mmol/L Tris –HCl (pH7.5)150μl,2.5倍体积的95%乙醇，置液氮中15min或-20℃过夜。15000r/min，离心10min，真空干燥...
...DNA上的一个片段作为DNA引物，以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，通过变性，退火和延伸过程，使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行，总体积为25μl，内含50mmol/l Tris—HCl pH7.5, 10mmol/L MgCl 2 、BSa 5mmol/L、80ng引物DNA和0.1μg连接的DNA或0.1μg...
荧光原位杂交 方法是一种 物理图谱 绘制方法，使用 荧光素 标记 探针 ，以检测探针和分裂中期的 染色体 或 分裂间期 的 染色质 的杂交。 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世纪80年代末在 放射性 原位杂交技术 的基础上发展起来的一种非放射性 分子 细胞遗传技术,以 荧光标记 取代 同...
原位杂交技术 (In situ hybridization，ISH)是 分子 生物学 、 组织化学 及 细胞学 相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。1969年国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾 核糖体 基因探针 与其 卵母细胞 杂交，将该 基因 进行定位，与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利...
此法标记原理如下图所示： 标记的HRP部分催化底物化学发光反应：氨基苯二甲酰肼 氨基苯二甲酸 +N 2 +光→X-光片上感光10～20min显定影。 光亮子在酚、萘及胺类等增强剂促进下，而使光亮增强。 这种方法就是利用特殊的酶底物，氧化后把产生的能量转变为光能放出，称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂，经增强剂将光能放大，在X光片上显示杂交信号...
...探针用前需进行变性处理，载片法时将切片在空气中晾干，加含探针的杂交液10μl于切片上，盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜， 3 H标记探针每10μl杂交液含1×10 5 cpm探针， 32 P或 35 S标记探针每10μl杂交液含5×10 5 cpm探针；如是漂浮切片，则用灭菌吸水纸将切片水份尽量吸干，然后入杂交液，探针浓度和载片法一样。入杂交液后...
光敏DNP由一连接臂组成，一端是2，4-二硝基苯，另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同，检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法：（1）DNA不心变性，必须溶于水中，取2～10μg10μl，加入二甲亚砜25μl，每微克DNA加入光敏DNp 2μg（在避光条件下），混匀。（2）置入冰浴中，在特制灯10cm下照...
在电镜水平应用较为广泛，因该法具有特异性中、灵敏度高、方法简便和背景染色淡等优点。蛋白A的免疫特异性在第五章 已作了介绍，PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性...
所有搜索结果仅供参考，如需解决具体问题请咨询相关领域专业人士。