人体载脂蛋白基因AⅠ、CⅢ和AⅣ在第11号染色体上的位置毗邻,它们分布在22000个核苷酸碱基对之内,排列顺序为AⅠ-CⅢ-AⅣ。AⅣ基因距AⅠ基因3'末端12000个碱基对。AⅣ的转录方向与AⅠ一致。CⅢ基因位于AⅠ和AⅣ之间。它的转录方向与AⅠ及AⅣ相反。ApoE、CⅠ和CⅡ的基因分布在第19号染体上,它们之间的距离仅为4000核苷酸碱基对。这三个基因以...
血浆中蛋白质种类繁多,对各种单一蛋白进行快速而又特异的定量。目前公认的方法是免疫测定法,即利用其特异的抗体,采用测定抗原抗体复合物的方式定量。血浆(清)中载脂蛋白是以脂蛋白形式存在的少量蛋白,在解联剂作用下,使载脂蛋白从脂蛋白中分离出来,再利用相应的载脂蛋白抗体进行测定。 载脂蛋白的免疫测定方法很多,目前采用的方法各有其特点,所需条件也有差异,现将医学检验中...
脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]由Berg在1963年制备LDL抗体过程中发现,当时测定Lp(a)在北欧人群分布率为30%,目前采用更灵敏的方法已发现其几乎存在于所有人群中,只是在血浆的浓度差异极大,从小于1mg/dl到大于100mg/dl。更重要的是Lp(a)在血浆中的水平与 冠心病 密切相关,其结构与纤维酶原极其相似。Lp(α)上...
1.用途:无脂蛋白血清(lipoprotein deficient serum,LPDS)主要用于LDL受体活性测定的细胞培养。 2.操作:常规采血,室温放置1~2h,以3kr/min离心10min,分离得到血清。向血清中按每1ml加0.33496g KBr,使其血清密度为d=1.215,或者按等体积加d=1.215的KBr液,按前述两方法铺在血清上面,按4...
(一)原理 以聚丙烯酰胺为支持介质,血清脂质用染料预染,使脂蛋白着色,经电泳后,一般可分出三条区带,即β-、前β-、α-脂蛋白。并可用光密度扫描仪检测其相对百分数,乘以总脂量,可求出三种脂蛋白的含量。 (二)试剂与仪器 1.试剂 (1)分离胶缓冲液:三羟甲基氨基甲烷(Tris)18.3g,lmol/L盐酸24ml,加水至100ml(pH8.9)。 (2)丙烯...
LDL是一组不均一的脂蛋白颗粒,其胆固醇含量约占总胆固醇的45%~50%。 测定血浆中LDL,首先同样要分离LDL,其分离方法有超速离心法、聚阴离子沉淀法、色谱法、电泳法及计算法等。以聚阴离子沉淀法简便易于操作,结果准确可靠。由于直接测定LDL有一定的困难,因为它是蛋白质脂类组成的颗状结构,胆固醇是其较为衡定的因素,因此采用测定LDL中所含的胆固醇的浓度作为...
一、超速离心法简介 为了研究,常需要得到脂蛋白纯品并进一步分离纯化载脂蛋白,迄至目前为止,采用密度梯度超速离心分离纯化各种脂蛋白仍是一种很好的方法。 超速离心法可分为制备型和分析型两种,根据其所用介质密度不同,可以分为等密度离心,密度梯度离心等。根据所用转头的类型不同可以分为角头、甩平头、垂直头和区带头离心法。脂蛋白分离中,采用密度梯度超速离心法较多。 离心...
载脂蛋白CⅢ基因位于11号染色体与载脂蛋白AⅠ-AⅣ形成一基因族,它位于载脂蛋白AⅠ下游,有三个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应(PCR)扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp,再用Sac-1酶切扩增产物,可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉...
抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似,但又有差异的蛋白质,通称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),按其结构和免疫化学性质的差异,又可分为五类,分别称为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。载脂蛋白抗体以IgG最为稳定。因载脂蛋白的体液中含量不同以及分离纯化的难易的差...
载脂蛋白分离纯化后,获得了所需要的纯品,该纯品纯度及其品种可通过下述方法进行鉴定。 一、免疫电泳法 免疫电泳法既可用于鉴定蛋白种类,又可鉴定其纯度。 制备1%的琼脂糖,以0.1mmol/L巴比妥缓冲液(0.05μ,pH8.6)为溶剂,制作一块约7×4cm的大小,厚度为0.2~0.3cm的琼脂糖凝胶,以 玻璃 板或薄膜为支持物,于凝胶正中打孔(直径0.2cm)...
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