酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的方法,是标记免疫技术的一种。近年来标记免疫技术飞速发展,应用不同标记物,根据不同原理、不同技术建立起来的检测方法层出不穷,而方法的创建者往往给同类的方法以不同的名称。因此确知某一方法属于哪一类型,对该方法的正确理解有着重要意义。本节先叙述各种标记免疫技术的要点,然后介绍酶免疫技术的分类,这样可以对酶免疫技术和其他非...
如 急性胰腺炎 时,血清和尿中淀粉酶活性显著升高; 肝炎 和其它原因肝脏受损, 肝细胞坏死 或通透性增强,大量转氨酶释放入血,使血清转氨酶升高; 心肌梗塞时,血清乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶明显升高; 当 有机磷农药中毒 时,胆碱酯酶活性受抑制,血清胆碱酯酶活性下降; 某些肝胆疾病,特别是 胆道梗阻 时,血清r-谷氨酰移换酶增高等等. 细胞衰老时会出现水分减少、...
虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA变性,解离成单链,迅置于冰上冷却。然后置于37℃~42℃杂交过夜。(2)RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景,因此,在操作步骤...
...后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近,Wolf等(1987)建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子,这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”(oligoribo-probes)已被成功的用于原位杂交实验。 图20-2 示cDNA转录为cRNA,可标记以不同的标记物,然后与细胞中的mRNA相结合。Biotin(生物素),Au(金),digo-(地高辛)
酶免疫技术一般分成酶免疫组化技术和酶免疫测定两大类。酶免疫组化技术与荧光抗体技术相似,酶标记抗体与组织切片上的抗原起反应,然后与酶底物作用,形成有色沉淀物,可以在普通光学显微镜下观察。如酶作用的产物电子密度发生一定的改变,则可用电子显微镜观察,称为酶免疫电镜技术。 酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相(homogenous...
众所周知,肝脏是一个代谢很活跃的器官,每个肝细胞含有数千个线粒体(约1000-2000个),线粒体含有极为丰富的酶类,估计有70多种酶;近代酶组织化学能从形态学显示的有30多种。 酶的组织化学与酶的生化学不同之处在于,酶的组织化学是在保存组织和细胞完整的生活状态下,通过底物的一系列反应呈颜色反应;而酶的生化学反应大都是将组织(或细胞)捣碎制成匀浆(或血清),...
组织和 细胞 形态结构及其 化学 成分的 定量研究 ,是以量的测定及其数据变化阐述组织和细胞的生长、 分化 、 代谢 和功能的演变以及对环境因素和致病因素的反应。生命科学的研究不断深入,定量技术的应用日益广泛并有所进展。 1、 显微镜 分光亮度定量术此方法是应用显微分光亮度计(microspectrophotometer)测定 组织化学 和 免疫 组织化学 ...
...个把 核苷酸 水解下来; 核酸内切酶 (endonuclease)则从核酸链中间水解3’,5’ 磷酸二酯键 ,将核酸链切断。很多 细菌 和 细胞 中都能识别外来的核酸并将其分解,1962年发现这是因为细菌中含有特异的核酸内切酶,能识别特定的核酸序列而将核酸切断;同时又伴随有特定的核酸修饰酶,最常见的是 甲基化 酶,能使细胞自身核酸特定的序列上 碱基 甲基化,...
...很大程度上采用间接法是出于无奈,因为在所测标本中酶蛋白浓度和其它 蛋白 相比明显偏低,例如在 血清 中大多数酶蛋白含量多在g/L水平,用一般化学方法从含量高达70g/L 蛋白质 的血清中将酶蛋白分离出来并直接测定其含量显然是很困难的。这样科学家才想到利用酶蛋白的催化特性来测定酶;微量酶蛋白可以明显加快所催化反应的速度,并在特定条件下,此反应速度(v)可和酶浓...
...酶的活性明显下降, 多酶 体系催化的 代谢 通路可因此而被关闭;反之,底物浓度稍有升高,则酶活性迅速上升,代谢通路又被打开,因此可以快速调节细胞内底物浓度和代谢速度。 (2)变构抑制剂常是代谢通路的终产物,变构酶常处于代谢通路的开端,通过 反馈 抑制,可以及早地调节整个代谢通路,减少不必要的底物消耗。 例如 葡萄糖 的氧化分解可提供能量使AMP、ADP转变成...
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