载脂蛋白分离纯化后,获得了所需要的纯品,该纯品纯度及其品种可通过下述方法进行鉴定。 一、免疫电泳法 免疫电泳法既可用于鉴定蛋白种类,又可鉴定其纯度。 制备1%的琼脂糖,以0.1mmol/L巴比妥缓冲液(0.05μ,pH8.6)为溶剂,制作一块约7×4cm的大小,厚度为0.2~0.3cm的琼脂糖凝胶,以 玻璃 板或薄膜为支持物,于凝胶正中打孔(直径0.2cm)...
一、分离脂蛋白 血浆是分离纯化脂蛋白的首选标本。从血浆(血清)中可分离得到CM、VLDL、LDL和HDL,再经脱脂除去脂蛋白中的脂质,剩下的部分为载脂蛋白的混合物。这一操作过程是获得载脂蛋白的最佳方法。 二、脱脂 由于各种脂蛋白含脂的种类和质量不同,脱脂剂组成略有差异。目前常用的几种脱脂方法有如下几种。 1.Warnick等法 将纯化的脂蛋白慢慢加入到预冷(...
载脂蛋白CⅢ基因位于11号染色体与载脂蛋白AⅠ-AⅣ形成一基因族,它位于载脂蛋白AⅠ下游,有三个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应(PCR)扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp,再用Sac-1酶切扩增产物,可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉...
ApoB是富含胆固醇和甘油三酯脂蛋白的重要组成成分,对脂质在人体转运、代谢、维持体内脂质水平的恒定起重要作用。大量临床资料及流行病学调查表明:血清ApoB及低密度脂蛋白(LDL)水平与 动脉粥样硬化 呈正相关,是其主要危险因素之一。近十年来,从分子水平研究ApoB,阐明动脉粥样 硬化 及 高脂血症 的发病机理,寻找其遗传标志受到广泛重视,现已发现:ApoB基...
一、ApoAⅠ ApoAⅠ是HDL的主要蛋白,占HDL总蛋白的70%。1989年由美国Breslow实验室首先将编码 人类 ApoAⅠ的基因分别整合到小鼠及大鼠的基因组内。ApoAⅠ在小鼠和大鼠体内的增强表达选择性地升高了血浆HDL胆固醇(HDL-C)水平。这项观察与人群研究结果一致,表明血浆ApoAⅠ浓度与HDL-C水平正相关,同时也提示可以采用升高血浆A...
某些原发疾病在发病过程中导致脂质代谢紊乱,进而出现 高脂蛋白血症 ,称为继发性高脂蛋白血症,作为继发性 高脂血症 或高脂蛋白血症原因是多方面的,如 糖尿病 、肾病及某些内分泌紊乱等继发性高脂蛋白血症。
血浆脂蛋白和脂质测定是临床生化检验的常规测定项目,其临床意义主要是:①早期发现与诊断 高脂蛋白血症 ;②协助诊断 动脉粥样硬化 症;③评价 动脉粥样硬化 疾患如 冠心病 脑梗塞 等危险度;④监测评价饮食与药物治疗效果。 血浆脂蛋白测定分离的常用方法有超速离心法、沉淀分离法、电泳分离法及免疫分离法。根据脂蛋白分离纯化或定性定量等不同的需要可以选择不同的方法,如...
Apo(a)是一结构复杂的糖蛋白,Lp(a)特征性的蛋白成分,占Lp(a)的20%。Apo(a)含糖量30%~35%,通过一个或多个二硫键与ApoB100相连。Apo(a)分子量在250000~800000之间,是目前所发现的最具多态性的 人类 蛋白质。Apo(a)多态性产生的原因在于其肽链长度不等而且糖基化程度不同;这是由于Apo(a)基因中Kringle...
ApoE是一种含有299个氨基酸的单链多肽糖蛋白(Mr34200),主要存在于CM、VLDL和HDL中。 1975年Utermann等将脱脂的VLDL进行IEF电泳时,首先提示ApoE多态性的存在。ApoE多态性的产生是由于其一个遗传位点上的3个主要等位基因ε2、ε3、ε4所编码的3种主要ApoE异构体E2、E3、E4之间单个氨基酸替换及其与四种受体的亲和力...
脂蛋白受体主要包括乳糜粒受体(CM-R)、极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)、低密度脂蛋白受体(LDL-R)、高密度脂蛋白受体(HDL-R)和清道夫受体(scavenger receptor)等。脂蛋白受体的检测与一般受体检测方法的原理及操作基本类同。目前研究最多,应用最广的要属LDL-R,其他脂蛋白受体如清道夫受体、VLDL-R等的检测方法与LDL-R基本...
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