1975年Kǒhler和Milstein首先报道用细胞杂交技术使经绵羊红细胞(SRBC)免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立起第一个B细胞杂交瘤细胞株,并成功地制得抗SRBC的单克隆抗体(monlclonalantibody,McAb)。迄今世界已研制成数以千计的McAb。 单克隆抗体的理化性状高度均一,生物活性单一,与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质
一、动物的选择 选择合适的动物进行免疫极为重要。选择时应考虑以直几个因素:①抗原与免疫动物的种属差异越远越好;亲缘关系太近不易产生抗体应答(如兔-大鼠之间,鸡-鸭之间)。②抗血清量的需要:大动物如马、骡等可获得大量血清(一头成年马反复采血可获得10000ml以上的抗血清);但有时抗体需要是不多,选用家兔或豚鼠即可。③抗血清的要求:抗血清可分为R型和H型。H型
1.固定 同常规电镜一样,应用醛类和四氧化锇双固定,以维持细胞和组织的超威结构。有文献报告以4%的甲醛溶液在pH7.2的磷酸缓冲内,在0℃进行固定,并用四氧化锇作后固定,不会影响抗原的反应能力。高锰酸钾能使大部分抗原失去活性,一般不宜采用。另外,铁蛋白标记抗体的特点之一是分子量大。因此,如用于细胞表面抗原的定位研究,可将样品直接放入固定液,否则需采取适当的措
1975年Kǒhler和Milstein首先报道用细胞杂交技术使经绵羊红细胞(SRBC)免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立起第一个B细胞杂交瘤细胞株,并成功地制得抗SRBC的单克隆抗体(monlclonalantibody,McAb)。迄今世界已研制成数以千计的McAb。 单克隆抗体的理化性状高度均一,生物活性单一,与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质
国外已有数篇Hp单克隆抗体研制成功的报道。Negrini等把从培养皿中分离的6株Hp混合后免疫小鼠,32d后将小鼠脾细胞与小 鼠骨 髓瘤细胞P 3 X63.Ag8.653融合,细胞融合悬液于96孔板上培养生长杂交瘤细胞集落,用整个Hp作靶细胞的间接ELISA法筛选抗体,共获得21株阳性单克隆抗体,其中以CB-26为最好。 研究证明单克隆抗体CB-26具有很强
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带
一、目的要求 1.正确理解统计研究的三个基本步骤一搜集资料、整理资料、分析资料—和它们之间的关系。 2.学会拟制调查表,整理表的统计表的基本原则和方法。 3.重点学会如何对原始资料进行整理,并正确绘制图表。 二、内容、步骤 1.按下题要求自制调查卡片一份 某医师想观察胎盘娩出方式与人工 流产 史的关系,须要统计项目是人工流产史(流产胎次)和胎盘娩出方式(包括
(1)将整封染色体铺片放置于金网上,在70%的酒精蒸汽固定4~15h,空气干燥。 (2)以强碱使DNA变性,将金网置于2×SSC内(应用0.1n NaOH调整至pH12),室温,2min。 (3) 脱水 ,以70%和95%酒精各冲洗3次,空气干燥。 (4)杂交,金网覆于平面 玻璃 皿( Petri dish)内的杂交液滴上,每滴约10~15μl,将此小碟置于
自1969年以来,我们高兴的看到原位杂交免疫细胞化学技术已从分子生物学的一个分支发展成为生命科学的有效的研究方法。在原位杂交免疫细胞化学发展过程中两个关键性的突破是核酸探针制备的标记物的改进。核酸探针由克隆的核酸探针发展到无克隆的合成的寡核苷酸探针;从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是,这一技术还处于不断的改进和更新的过程中。
自1969年以来,我们高兴的看到原位杂交免疫细胞化学技术已从分子生物学的一个分支发展成为生命科学的有效的研究方法。在原位杂交免疫细胞化学发展过程中两个关键性的突破是核酸探针制备的标记物的改进。核酸探针由克隆的核酸探针发展到无克隆的合成的寡核苷酸探针;从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是,这一技术还处于不断的改进和更新的过程中。
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