制备单克隆抗体是复杂而费时的工作,整个技术流程如图11-2。 (一)抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原,可取1×10 7 个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化,如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原,可将抗原所在的电泳条带切下,研磨后直接用以动物免疫。 选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小...
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten ?CCoupled techn...
...的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把 烟草 花叶 病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后,他们还把胶体金与抗胶原血清,植物血凝素,卵白蛋白...
酶反应 定理:任何酶 催化 反应,最多进行到平衡状态为止,酶可影响平衡调节,但并不改变平衡点,酶的活性基只能催化一个特定反应,具有效能 专一性 和方向专一性。也就是说,如果我们能够将酶激活,那么就会有效地调节生命的新陈代谢过程,提高 自身免疫 力。而按照酶作用定理,这种通过酶的激活来调节新陈代谢平衡的方式,永远不会改变平衡点!
...反映荧光抗体的特异性染色质量,一般要求F/P的克分子比值为1~2。过高时,非特异性染色增强;过低时,荧光很弱,降低敏感性。 1.蛋白质定量 测定荧光抗体的蛋白质mg/ml量。 2.结合荧光素定量 先制作荧光素定量标准曲线,即准确称取FITC1mg,溶于10ml 0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液中,再用0.01mol/l pH7.2PBS稀释到100m...
ELISA的技术要点包括三个方面:试剂的制备、反应条件的选择和操作的标准化。
...,故生产上往往根据不同的酶制定各自的酶活力单位,例如 蛋白酶 以1分钟内能水解 酪蛋白 产生1微克 酪氨酸 的酶量为1个蛋白酶单位; 液化 型 淀粉酶 以1小时内能液化1克 淀粉 的酶量为1个单位,等等。在测定酶活力时,对反应温度、PH值、底物浓度、作用时间都有统一规定,以便同类产品互相比较。 酶单位并不直接反映出酶的绝对数量,它只不过是一种相对比较的依据。
...制成的膜,许多有机物在酶的 催化 下与氧反应,放出NH3、H2O2、CO2等,它们溶解到内电解液中,由有关的离子选择电极测出它们的变化,从而测定该有机物。由于酶的 专一性 强,故 酶电极 的选择性特别好。目前已有几十种酶电极,它可以测一些 生化 体系的物质,如 尿素 、 葡萄糖 、 氨基酸 、 胆固醇 、 青霉素 、苦味仁苷等。 酶电极是指电极敏感膜表面覆盖...
在一般性意义上,把参与 细胞呼吸 的酶,总称为 呼吸酶 。(2)在特殊意义上,系指 O.H.Warburg的呼吸酶。O.H.Warburg测定了 一氧化碳 对 呼吸 的抑制由光照射而又恢复的 作用光谱 ,指出与氧直接反应的酶是 血红蛋白 。并将之称为 呼吸酶 。以后,又称为 氧传递酶 。相当于现在的 细胞色素氧化酶 。(3) 细菌 进行有氧呼吸时,必须通过 ...
T细胞活化中所发生的多种蛋白分子酪氨酸磷酸化提示必需有蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatase,PTPase)来拮抗这种作用,通过负反馈来维持机体生理功能的平衡。PTPase基因是一个多基因家族,主要位于人第20号染色体上,不同来源的PTPase cDNA在结构上差别较大,其表达的产物一般分为受体和非受体样PTPase两类...
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