...与转化细胞的DNA进行分子杂交,可以直接筛选和鉴定目的序列克隆。常用的方法是将转化后生长的菌落复印到硝酸纤维膜上,用碱裂菌,菌落释放的DNA就吸附在膜上,再与标记的核酸探针温育杂交,核酸探针就结合在含有目的序列的菌落DNA上而不被洗脱。核酸...
...片段的分离;③靶DNA片段标记;④待测样品mRNA的提取;⑤标记cDNA探针对待检样品的杂交;⑥放射自显影或显色分析。近年来出现的RT-PCR检测特异性mRNA的方法也广泛用于细胞因子研究领域。该法具有灵敏、快速等优点,甚至从1~10个细胞...
...片段的分离;③靶DNA片段标记;④待测样品mRNA的提取;⑤标记cDNA探针对待检样品的杂交;⑥放射自显影或显色分析。近年来出现的RT-PCR检测特异性mRNA的方法也广泛用于细胞因子研究领域。该法具有灵敏、快速等优点,甚至从1~10个细胞...
...DNA液混合于980μl水中,混匀后测定,吸收值乘以50即为DNA浓度(μg/ml);(8)制备好的DNA液储于-20℃备用,用前取出冻融后煮沸。二、关于探针的标记(一)cRNA探针的同位素标记1.标记液(转录标记)2.转录缓冲液※:用地高辛...
...通过检测病原体遗传物质来确认病原体也许是检查病原体为直接的方法了。目前比较成熟的技术包括基因探针技术和PCR技术。(一)基因探针技术用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段制备成细菌探针,待检标本经过短时间培养后,经过点膜、裂解...
...短的重复顺序分别长16、17、32、33、37、41、62、64和376bp,但这些重复顺序几乎都共有一种“核心顺序”。“核心顺序”长10~15bp。如果人工合成很短的重复顺序作为DNA分子杂交的探针,同经限制性内切酶酶切的人体DNA作...
...。(3)酶促合成核酸:在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板,利用逆转录酶合成单链cDNA,再以大肠杆菌DNA聚合酶I合成双链的结构基因。(4)RNA探针。...
...HbF>30%诸特点,临床诊断不难。家系调查、α与β链合成比率测定及基因分析可进一步确诊。目前采用聚合酶链反应合并寡聚核苷酸探针杂交方法,或聚合酶链反应合并限制性内切酶酶切方法,进行基因分析和产前基因诊断。 3.杂合子(β )珠蛋白生成障碍性贫血...
...可能增多。 2.聚合酶链反应检测 经血或组织中结核杆菌特异的荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)定量测定可对疾病做出迅速诊断,有研究提示:PCR检测不同部位组织结核杆菌DNA是一比较快速灵敏的方法,但...
...可能增多。 2、聚合酶链反应检测 经血或组织中结核杆菌特异的荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)定量测定可对疾病做出迅速诊断。 有研究提示:PCR检测不同部位组织结核杆菌DNA是一比较快速灵敏的方法...
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