...（目的 基因 ）导入 宿主 细胞 ，使之 传代 、 扩增 、表达的工具。载体有 质粒 （plasmid）、 噬菌体 、 单链 丝状噬菌体和 粘性末端 质粒（粘粒）、 病毒 等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的 遗传标记 ；有供外源DNA插入的 位点 ；本身体积小等特征。 质粒存在于多种 细菌 ，是 染色体 （核）以外的独立 遗传因子 ，由双链...
...ned,cloning)含义指在生物体外用重组技术将特定基因插入载体分子中，即 分子克隆 技术。 将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接，然后引入寄主细胞，再筛选获得重组的克隆，按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类。 cDNA克隆是以mRNA为原材料，经体外 反转录 合成互补的DNA(cDNA)，再与载体DNA分子连接引入寄主细胞。每一cDNA...
...所示。 图23-4 pBR322克隆DNA片段的程序 从图23-4可见，外源DNA片段同pBR322都经Bam HⅠ酶切，所以有相同的单链“粘性末端”，通过DNA连接酶可以构成重组DNA分子。由于pBR322的BamHⅠ酶切点在四环素的抗性基因中，所以Bam HⅠ酶切后使这个抗性基因失活。如果酶切后的质粒pBR322自身又重新连接，则恢复对四环素的抗性，转化...
...糖单位，均含有乙酰氨基已糖和糖醛酸(硫酸角质素例外，不含糖醛酸而代之以半 乳糖 )。除透明质酸外都含硫酸。因而糖胺多糖为酸性，加之分子大具有粘性，故又称为酸性粘多糖(acidmucopolysaccharide,AMPS)。 经电子显微镜图形及实验推测，蛋白多糖为“瓶刷状”分子结构(图13－1)，其蛋白多糖亚单位(“刷毛”)非共价附着于透明质酸主链上(bac...
...影响交换值。 由于交换值具有相对稳定性，常以该数值表示两个基因在同一染色体上的相对距离—— 遗传距离 。 2、 基因工程 学重组率 重组率：连接反应结束后，含有外源DNA片段的 重组 分子 数与加入的载体分子数之比。较为理想的重组率为25-75% 提高重组率的方法： 连接反应条件 外源片段：载体＝2:1-10:1（分子数），增加碰撞机会，减少自身环化。 载体...
...在分裂的淋巴细胞也含有逆转录酶。逆转录酶的作用是以dNTP为底物，RNA为模板，tRNA（主要是色氨酸tRNA）为引物，在Trna3’-OH末端上，5’－3’方向，合成与RNA互补的DNA单链，称为互补DNA（cDNA），单链cDNA与模板RNA形成RNA-DNA杂交体。随后在逆转录酶的RNase H活性作用下，将RNA链水解成小片段。cDNA单链的3’末端...
核苷酸 转移酶 （ nucleotidyl transferase ）是将核苷酸从一物质转移至另一物质的酶。包括末端核苷酸转移酶， DNA聚合酶 ， RNA聚合酶 。 末端核苷酸转移酶（terminal nucleotidyl transferase） 这是一种在反应混合物中有任何碱基存在时能使 DNA 链在3′—OH端延伸的酶。可用于 遗传 载体的构建以产...
...外源DNA长度之和在39～53kb之间。 置换型载体DNA用选定的限制酶完全酶切后，要设法除去中间片段，只留下左臂和右臂以便用外源DNA片段连接，包装成重组噬噬体。这是因为左臂和右臂与中间片段间都有单链“粘性末端”，在连接酶作用下可以重新恢复原来的结构，从而影响了同外源DNA的连接。区分重组噬菌体形成的噬菌斑和重新恢复的载体噬菌体形成的噬菌斑的方法是用Xga...
...cDNA的第二链 ③填补双链DNA3’凹端 ④DNA序列分析 耐热DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶等） 聚合酶链反应 （PCR） DNA 连接酶 连接两个DNA分子或片段 多核苷酸 激酶 催化 多核苷酸5’ 羟基 末端 磷酸 化，制备 末端标记 探针 末端转移酶 在3’末端加入同质多聚物尾 SI核酸酶， 绿豆 核酸酶 降解 单链DNA 或 RNA ，使双链...
...pHC79系由质粒pBR322和噬菌体λ的cos位点的一段DNA构成（图23-5），全长43.kb。在包装时，cos位点打开而产生噬菌体λ的粘性末端。由于pHC79有pBR322DNA，所以也就有氨苄青霉素抗性和四环素抗性两个标记。图23-5说明了克隆基因时有用的限制酶切点。所以可以说柯斯质粒是一类特殊的重组质粒。 图23-5 柯斯质粒pHC 79 设计构建...
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