...灰石（HAP）层析或吸附是液相杂交中最早使用的方法。在液相中杂交后，DNA：DNA杂交双链在低盐条件可特异地吸附到HAP上。通过离心使吸附有核酸双链的HAP沉淀，再用缓冲液离心漂洗几次HAP，然后将HAP置于计数器上进行放射性计数。 （2）亲合吸附杂交：生物素标记DNA探针与溶液中过量的靶RNA杂交，杂交物吸附到酰化亲合素包被的固相支持物（如小球）上，用特异...
前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。由...
核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备： （1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。 （2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚，分子量较小的寡核苷核。 （3）酶促合成核酸：在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板，利用逆转录酶合成单链cDNA，再以...
...造式都是 ，它们的性质除旋 旋光性不同（旋光方向相反， 比旋 亮度的绝对值相同）外，其他 物理 、化学性质都一样（表17-1）。这两种乳酸的分子结构可用球棒模型表示（图17-5）。 表17-1三种乳酸性质的比较 ［α］20D（水） 熔点/℃ PKa （+）-乳酸 +3.82° 53 3.79 （-）-乳酸 -3.82° 53 3.79 （±）-乳酸 0 18...
...序列的DNA片段的位置和大小。 （1）琼脂糖凝胶电泳：利用琼脂糖凝胶电泳可以很容易地将DNA限制酶消化片段（0.3～25kb）分离开。分离大分子DNA片段（800～12000bp）用低浓度琼脂糖（0.7%），分离小分子片段（500～1000bp）用高浓度琼脂糖（1.0%）,300～5000bp的片段则用1.3%的琼脂糖凝胶，根据分离样品量、分离速度和分辨率要...
操纵元中被调控的编码 蛋白质 的 基因 可称为 结构基因 (structural gene, SG)。一个操纵元中含有2个以上的结构基因，多的可达十几个。每个结构基因是一个连续的开放 读框 (open reading frame)，5′端有翻译起始码( DNA 存储链上是ATG， 转录 成mRNA就是AUG)，3′端有翻译终止码(DNA存储链上是TAA、TG...
结构基因 是一类编码 蛋白质 或RNA的 基因 ．在 大肠杆菌 乳糖 代谢 的基因调节系统中有3个连锁在一起的结构基因。 LacZ基因：决定β- 半乳糖苷酶 的形成．而β-半乳糖苷酶将乳糖水解成 葡萄糖 和 半乳糖 ，作为 细菌 代谢活动的碳源。 LacY基因：决定β- 半乳糖苷透性酶 的合成。该酶的作用是使乳糖易于进入E.coli的 细胞 中。 LacA基...
固相核酸杂交多是在膜上进行，因此，以下主要介绍固相膜的核酸分子杂交方法： 1．DNA的变性 DNA变性解链是杂交成功的关键。Southern印迹杂交时DNA在凝胶中变性，变性方法是将凝胶浸在数倍体积的1.5mol/l NaCl和0.5mol/l NaOH中1h然后用数倍体积的1mol/l Tris –HCl(Ph8.0)和1.5mol/l NaCl溶液中和1...
超二级结构(supersecondarystructure)是指在多肽链内顺序上相互邻近的二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成规则的二级结构聚集体。目前发现的超二级结构有三种基本形式：α螺旋组合(αα)；β折叠组合(βββ)和α螺旋β折叠组合(βαβ)(图1－7)，其中以βαβ组合最为常见。它们可直接作为三级结构的“建筑块”或结构域的组成单位，是...
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检测。 所谓杂交（hydridization）指两个以上的分子因具有相近的...
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