以质粒或噬菌体作载体进行DNA克隆，在理论上是很简捷的，即用一种限制酶切割质粒DNA，然后在体外与外源，DNA（如干扰素基因，生长激素基因）相连接，再用所得到的重组质粒转化细菌如大肠杆菌，以鉴定重组DNA。 通常所用的质粒载体有pBR322、pUC18、pUC19等，噬菌载体有M13噬菌体载体等。 图24-1 质粒载体的定向克隆 一、质粒或噬菌体载体与外源D...
...reys根据β珠蛋白基因座位近旁出现的RFLP频率同测定的核苷酸总数，推算出人体基因组的遗传异质性约为每100个核苷酸中有一个差异。后在人体DNA随机片段的文库中分离出高度变异的超变区。从1982年起，分别在人的胰岛素基因，α类珠蛋白基因，肌动蛋白基因和C-Ha-ras-1基因中陆续发现了这些超变区。这是一些很短的顺序或称“小卫星顺序”串联重复所组成。不同等...
研究发现显示，伴随胃细胞癌前改变的胃泌素(由胃产生的激素)水平增高，最终可能用作预测胃癌的一个标记。 据英国诺丁汉大学医院的休·沃森(Sue A. Watson)博士和同事称，胃泌素不仅刺激胃酸分泌，还可作为多种胃壁细胞的生长因子。 沃森博士等想知道胃泌素分泌过多和细胞上受体过多是否会引起胃细胞的逐步改变而发展为癌，他们对正常的、发炎的、癌前的和完全恶变的胃...
随机化是指每个受试单位以概率均等的原则，随机地分配到实验组与对照组。例如将30只动物等分为3组，对其中每只动物来说，分到甲组、乙组、丙组的概率都应是三分之一。如果违背随机的原则，不论是有意或无意的，都会人为地夸大或缩小组与组之间的差别，给实验结果带来偏性。例如在营养学研究中，有的以实验动物 体重增加 情况作为饲料营养价值高低的标志。但体重的增加还同动物健康状...
DNA酶Ⅰ（DNaseⅠ）是随机水解双链或单链DNA的一种内切酶，使DNA分子降解成带有5’磷酸末端的单核苷酸和寡核苷酸的混合物： 在进行重组DNA研究时，必须注意防止DNA酶的污染，否则制备的DNA样品将会降解。因此器皿或试剂高温处理，样品中加EDTA，或放置冰上以破坏或抑制酶活性。
（一） DNA 的 碱基组成 规律 组成DNA 分子 的 脱氧核苷 酸主要有四种，即dAMP，dGMP、dCMP和dTMP（d代表“脱氧”的意思），此外还含有少量的稀有 碱基 （主要是 甲基化 碱基）。50年代初，E.Chargaff等人对来自不同 生物 的DNA进行完全水解，对碱基进行了定量测定，总结出如下规律，一般称它为Chargaff规则。 1．所有D...
...am和Gilbert（1977年）提出的化学降解法，其中双脱氧链终止法是目前应用最多，最好的技术。 一、Sanger双脱氧链终止法原理 通常DNA的复制需要：DNA聚合酶，单链DNA模板，带有3'-OH末端的单链寡核苷酸引物，4种dNTP（dATP、dGTP、dTTP和dCTP）。聚合酶用模板作指导，不断地将dNTP加到引物的3'-OH末端，使引物延伸，合成...
基本原理是：硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DNA，将原位地固定于膜上。 图13－6 Southern印迹杂交示意图 当含有特定基因片...
金属类标记物的免疫标记法同切片免疫染色，即将标记物与抗体相结合，通过直接或间接法显示抗原部位。胶体金可与蛋白A相结合后与IgG分子中的Fc 段相结合。哪与卵白素（a－vidin）相结合可与结合抗体的生物素（biotin）反应。免疫金银染色法在胶体金标记后，再进行银液显影。病毒（包括噬菌体）标记物多采用不标记抗体法，即搭桥法。此法的原理是采用同种动物制备抗原的...
...许多不足之处，近年来国内外已将HLA分型技术由抗原水平发展到基因水平。 （一）限制性片段长度多态性检测技术 这是首先建立的对多态性进行检测的DNA分析技术。个体间抗原特异性来自氨基酸顺序的差别，后者由编码基因的碱基顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同，从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DN...
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