...通过酶的显示使抗原定位,称为酶标记抗体技术。其后,1969年Mason,1970年Sternberger又在基础上发展了非标记酶抗体法。包括酶桥法和过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物法(PAP)。这一技术的建立,为医学、生物学的各个领域提供了一个...
...,pH8.0~8.5为宜,在冰浴中反应15~30min后,加入多量氨基酸(如甘氨酸),使过量标记酯消耗掉以终止反应。此法避免了蛋白质与氧化剂的接触,又避免了与放射性碘原子的直接接触,可防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤,适用于标记缺乏酪氨酸的...
...清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。按照标准方法制32p ATP标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×...
...标记抗原抗体复合物形成的量就随着非标记抗原的量而改变。非标记抗原量增加,相应地结合较多的抗体,从而抑制标记抗原对抗体的结合,使标记抗原抗体复合物相应减少,游离的标记抗原相应增加,亦即抗原抗体复合物中的放射性强度与受检标本中抗原的浓度呈反比(图...
...此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少。(1)用0.025mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中。(2)用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml的溶液,按1%球蛋白液体积的10...
...10的指数方式增加,较PCR高得多。扩增产物用葡聚糖珠夹心杂交法检测:产物先与标记的探针杂交,再与包被在葡聚糖珠上的另一互补寡核苷酸(与标记探针互补的位置不同)杂交、检测。该方法同一般杂交检测技术相比,特异性要高出许多。TAS主要特点是扩增...
...费用较高。血清抗体的检测则不能确定是否有新近感染,也不以评价治疗的效果。而近年来发展起来的分子生物学技术简单、快速、可靠,不仅对Hp的诊断具有高度敏感性和特异性,而且还可以用于对Hp的分型。最早的研究方法是用限制性核酸内切酶直接消化培养,鉴定...
...当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下:(1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。(2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时...
...变性、预杂交和杂交后,利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果并判断病原体的性质。基因探针技术操作比较复杂,加之同位素污染等问题,目前尚不能普及应用。近年来发展起来的地高辛标记的非同位素探针,从探针标记到杂交都很方便,只是价格昂贵,仍限于...
...PBS冲去固定液,加含探针的杂交液覆盖(光敏生物素标记探针浓度为2.5ng/μl),在温盒中50℃孵育1~2h,取出后直接加入胶体金标记链亲合素(1mg/ml)室温孵育15min,然后在室温或37℃下用大容量(200ml/每片)洗脱液(2×...
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