...按限制酶的组成、与修饰酶活性关系,切断核酸的情况不同,分为三类:Ⅰ类限制性核酸内切酶 由3种不同亚基构成,兼具有修饰酶活性和依赖于ATP的限制性内切酶活性,它能识别和结合于特定的DNA序列位点,去随机切断在识别位点以外的DNA序列,通常在...
...短的重复顺序分别长16、17、32、33、37、41、62、64和376bp,但这些重复顺序几乎都共有一种“核心顺序”。“核心顺序”长10~15bp。如果人工合成很短的重复顺序作为DNA分子杂交的探针,同经限制性内切酶酶切的人体DNA作...
...而影响杂交特异性。寡核苷酸探针多用于核酸“点”突变检测,该探针可用核酸合成仪人工合成。克隆探针一般较长,特异性图18-5 DNA随机引物标记法好,标记量大,杂交检出信号强。合成探针长度短,一般在20-50核苷酸之间,过长合成成本高,且易出现...
...基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子,要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来,需要各种限制性核酸内切酶(restriction endonuclease);要把不同片段连接起来,需要...
...引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现已制备了酵母人工染色体(YAC)大的线状DNA...
...1min,各1min。空气干燥。2.探针标记和纯化用缺口平移法将生物素11-dUTP标记在DNA核酸探针上。3.变性与杂交加20~100ng生物素标记探针到杂交液中,加入5μl 20mg/ml人或鲱鱼精子DNA,总容量为30~40μl,离心...
...复性DNA,不同源DNA复性的过程叫核酸杂交,形成的双链叫杂化双链。杂交可以发生在DNA分子之间,也可以发生在DNA与RNA分子之间,如DNA-DNA′;DNA-mRNA。影响复性的因素很多,如离子强度、温度、DNA浓度和长度等,一般采用...
...复性DNA,不同源DNA复性的过程叫核酸杂交,形成的双链叫杂化双链。杂交可以发生在DNA分子之间,也可以发生在DNA与RNA分子之间,如DNA-DNA′;DNA-mRNA。影响复性的因素很多,如离子强度、温度、DNA浓度和长度等,一般采用...
...1份血清升高或下降4倍以上,则有助于病原诊断。 4.抗体测定与病毒核酸检测 型物异性抗体,补体结合抗体的测定以及用分子杂交法或聚合酶链反应(pcr)检测心肌细胞内的病毒核酸也有助于病原诊断。部分病毒性心肌炎患者可有抗心肌抗体出现,一般于...
...DNA释放率亦为中等。由此可见,对不同类型的组织DNA提取,蛋白酶K的孵育时间可作适当调整,以求最大量地获取大分子DNA。此外,对于Dubeau等提出的DNA提取过程中分次消化步骤的必要性,也有人提出异议。因为低、中分子量的核酸存在对限制性内切...
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