...核酸序列,已广泛应用于临床检验和科学研究。Leary等(1983)用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。Forst等(1985)发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法,使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进...
...ACTCAA-AAGAATTGACGGGGGCCCGCACAa3′(30mer),衣原体16Sr RNA基因中的位点为909-938,与PCR扩增片段中间序列互补。以DNA合成仪固相亚磷酸三酯法合成并纯化。b.标记:按Riely等方法略有修改。以末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)催化Bio-11...
...着色可能迭加,致使背景着色较单独使用时增强,S/N下降,所以各研究室应根据实验目的和条件,合理选择染色方法为宜。简述染色步骤如下:(1)切片准备同一般间接法。(2)切片孵育A抗原,特异抗体1~2h室温。(3)PBS冲洗,孵育HRP标记抗体45...
...DNA作分子杂交后,可在曝光的X线片上看到RFLP。图23-8是用分子杂交法检测RELP示意图。图23-8 分子印迹杂交法则 RFLPs的示意图这是通过限制酶A识别点的改变出现DNA的RFLP,再以合适的DNA片段作为分子杂交的探针,在探针...
...,因此可将对应于突变热点区的寡核苷酸探针合成或点加于DNA芯片上,通过一次杂交完成对待测样品多种突变可能性的筛查,实现对多种遗传病的高效快速诊断。国外现已成功地将这一技术用于β-珠蛋白基因的突变检测以诊断地中海贫血,其高准确性及高自动化特性...
...法两大类。按照鉴定的目的和对象不同,也可分为免疫鉴定法、细胞生物学鉴定法、生物效价测定法、纯指标测定法、DNA遗传标记鉴定法、mRNA差异显示鉴定法等。免疫鉴定法是利用中药含有的特异蛋白为抗原制备的特异抗体,与供试品种特异抗原结合产生沉淀...
...混匀后加样2%琼脂糖凝胶板,70V电泳15-20min,EB染色5min。紫外灯下观察扩增条带。 (2)Southern印迹杂交法:用32P标记的特异性探针检测PCR产物,方法同上。 总之,在HSV感染性疾病的临床诊断中,PCR能对前病毒或...
...cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有含子和外显子的...
...DNA从细胞中洗提出来,然后在细胞和玻片的水相中进行PCR。用地高辛标记的人全基因组DNA探针杂交表明在起始循环中DNA极微量,而30个循环后很丰富。常规细胞染色表明只有少量的形态改变。Silde-PCR对于玻片上的细胞样品提供了一种较好的...
...用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应(PCR)扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。(金伯泉)...
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