...组织的渗出液或刮取物,接种鸡胚卵黄囊或传代细胞,分离衣原体,再用免疫学方法鉴定。 (三)血清学试验 主要用于性病淋巴肉芽肿的辅助诊断。常用补体结合试验,若双份血清抗体效价升高4倍或以上者,有辅助诊断价值。也可用ELISA、凝集试验。 (四)PCR试验 设计不同的特异性引物,应用多聚酶链式反应可特异性诊断沙眼衣原体,具有敏感性高,特异性强的特点,现被广泛应用。
典型PCR反应混合物中,所用酶浓度为2.5U/μl,常用范围为1~4U/100μl。由于DNA模板的不同和引物不同,以及其它条件的差异,多聚酶的用量亦有差异,酶量过多会导致非特异产物的增加。 由于生产厂家所用兵配方、制造条件以及活性定义不同,不同厂商供应的TaqDNA聚合酶性能也有所不同。 Cetus公司酶定义是:1个酶单位是指在以下分析条件下,于74℃,3...
...因长度就可以有~10600种不同的序列,随意合成的DNA绝大多数肯定是不具有生物功能或无法知道它会有什么功能的,因而只能模仿自然界生物中已知的基因序列来合成,而化学合成这样长的基因DNA序列,其价格远高于用PCR法获得基因,所以目前很少全部用化学方法去合成基因。但人工设计化学合成核酸片段作为引物、接头等已经是分子生物学和基因工程中必不可少的、十分重要的手段。
采用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性(RFLP),即PCR-RFLP技术从基因水平检测ApoE基因多态性(基因型),操作简便、快速准确。 1.仪器与试剂 (1)仪器:电泳仪、基因扩增仪; (2)试剂:Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA参考物(pBR322DNA/HacⅢmarkers)、HhaⅠ,其余试剂均为分析纯。 2.实验方法 (1)引物...
...箭头:BamHⅠ切点 一种较简便的方法是直接用α 探针 进行 斑点杂交 ,自显影后根据斑点深浅的不同也可以对α地贫作出诊断。更为简单的方法是PCR诊断,即在α基因缺失范围内设计一对 引物 ,然后PCR 扩增 胎儿 的DNA,如为Barts 水肿胎,则无扩增产物,电泳后无任何带纹,从而可建议进行 人工流产 ,但此法不能诊断其它类型的地贫(除非另设计引物用作PC...
...抗体进行直接ELISA反应检测O157∶H7大肠埃希杆菌。 3.基因检测 应用EHEC特异性DNA探针,其敏感性、特异性均可达99%;或应用PCR对EHEC DNA序列分析,发现其溶血素AB基因为EHEC特有,其特异性强,敏感快速,3~4h可出结果。其他尚有对SLT1、SLT2两对寡核苷酸引物同时扩增的多重PCR法,但尚未在临床广泛应用。基因检测可用于临床研...
...A 探针 已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。 四、 聚合酶链式反应 (PCR) (一)标本的采集及处理 采集的标本包括患者的血液、尿,以及腺体组织等。由全血制备的 血沉 棕黄层(buffy coats)可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中。冻存标本应避免反复冻融。 尿液标本经2500r...
...A 探针 已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。 四、 聚合酶链式反应 (PCR) (一)标本的采集及处理 采集的标本包括患者的 血液 、尿,以及腺体组织等。由全血制备的 血沉 棕黄层(buffy coats)可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中。冻存标本应避免反复冻融。 尿液标本经250...
...A 探针 已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。 四、 聚合酶链式反应 (PCR) (一)标本的采集及处理 采集的标本包括患者的 血液 、尿,以及腺体组织等。由全血制备的 血沉 棕黄层(buffy coats)可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中。冻存标本应避免反复冻融。 尿液标本经250...
...A 探针 已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。 四、 聚合酶链式反应 (PCR) (一)标本的采集及处理 采集的标本包括患者的 血液 、尿,以及腺体组织等。由全血制备的 血沉 棕黄层(buffy coats)可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中。冻存标本应避免反复冻融。 尿液标本经250...
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