...Besnard等(2000)报道1例以肠梗阻为主要表现的患者,用PCR方法检测出血及脑脊液中EB病毒均阳性,进一步用RNA探针原位杂交方法检测出位于小肠肌层、肠系膜淋巴结及胃部的EB病毒。 本病病理改变:主要是发生于周围或中枢自主神经系统;直接影响...
...2000)报道1例以肠梗阻为主要表现的患者,用PCR方法检测出血及脑脊液中EB病毒均阳性,进一步用RNA探针原位杂交方法检测出位于小肠肌层、肠系膜淋巴结及胃部的EB病毒。 本病病理改变:主要是发生于周围或中枢自主神经系统;直接影响周围神经节...
...细菌中释放出来的噬菌体颗粒只含单链DNA,其中包含了克隆DNA片段的二条互补链中的一条,因此可用来作为对DNA测序的模板。另外,可用来产生单链的DNA探针以选择和分离互补的RNA。M13的RF型是双链DNA,便于限制酶的识别和切割,克隆进双链...
...Southern印迹杂交示意图当含有特定基因片段已原位转移到膜上后,即可与同位素标记了的探针进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交滤膜,加入含有变性后探针的杂交溶液后,在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的...
...无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/l Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。(二)PCR...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...制作标记DNA探针②合成cDNA的第二链③填补双链DNA3’凹端④DNA序列分析耐热DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶等)聚合酶链反应(PCR)DNA连接酶连接两个DNA分子或片段多核苷酸激酶催化多核苷酸5’羟基末端磷酸化,制备末端标记探针...
...CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′),可以分别扩增出HSV-1 469bp DNA片段(1981~2359)、HSV-2 391bp片段(1561~1953):从二型PCR扩增产物中设计了一个不分型的特异性探针HSVP3 5 ...
...箱内于37℃培养2~3d,作为HIV分离的靶细胞。2.模板核酸的提取。制备PCR模板核酸有多种方法,但其基本原理大致相同,使用的试剂因采取的方法不同而异。这里分别介绍两种从外周血单核细胞中提取DNA和RNA的方法。(1)从外周血单核细胞中...
...酶的胰RNA酶),振荡,贮存于-20℃。(二)质粒DNA的大量制备(1)同上1.(1)(2)将1ml含菌液倒入含相应抗生素的Lb 100ml中,37℃振荡培养至A590=1.0(5~6h)。(3)加氯霉素(170μg/ml)扩增,37℃温箱...
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