...放置2小时。在4℃下对0.05mol/LpH8.0Tris缓冲液透析平衡,即得酶标抗体。辣根过氧化物酶可溶解于50%饱和度硫酸铵中。用上法交联后可用50%饱和度硫酸铵沉淀酶标抗体,弃去上清中游离酶。戊二醛一步法操作简便、有效,而且重复性好。...
...用量大,标本不能长期保存、需较昂贵的荧光显微镜等问题。几乎在同一时期,电子显微镜在医学生物学领域中得到了广泛的应用。为克服荧光抗体法的不足、并能在超微结构水平定位抗原物质的存在部位,Nakane(1966)等成功地引入了酶代替荧光色素标记...
...在大肠杆菌T4噬菌体多聚核苷酸激酶(T4PNK)的催化下,将γ-32P-ATP上的磷酸连接到寡核苷酸的5’末端上。要求标记的寡核苷酸5’端必须带羟基。反应式为:此法适用于标记合成的寡核苷酸探针。如将底物改为Bio –11 –dUTP,也...
...CSFcerebrospinal fluid脑脊液CTCholera toxin霍乱毒素CT-HRPcholera-toxin-horseradish peroxidase霍乱毒素辣根过氧化物酶CUCChronic ulcerous colonitis慢性溃疡性...
...一、Southern印迹法Southern印迹法在鉴定LDL-R基因缺失突变中得到了广泛的应用。采用多种限制性内切酶切,以LDL-R基因片段和外显子特异性片段作探针,进行杂交,再放射自显影,对FH进行限制性酶切图谱分析,可检测FH患者的...
...一、Southern印迹法Southern印迹法在鉴定LDL-R基因缺失突变中得到了广泛的应用。采用多种限制性内切酶切,以LDL-R基因片段和外显子特异性片段作探针,进行杂交,再放射自显影,对FH进行限制性酶切图谱分析,可检测FH患者的...
...(Gold—labelled antigen detection method, GLAD 法)此法是Larson(1977)年首先提出的,应用放射性同位素如125I或酶标记抗原进行染色。先用特异性抗体与组织抗原反应,标记的纯抗原又与特异性...
...PBS固定5min 。(6)PBS冲洗2×3min。(7)0.25%乙酸酐(0.1mol/L 三乙醇胺配)10min。(8)2×SSC冲洗10min。(9)杂交:如是cDNA探针用前需进行变性处理,载片法时将切片在空气中晾干,加含探针的杂交...
...,用一种称之为限制性核酸内切酶的酶,将其切成细小的节段。通过电泳技术,在凝胶中分离这些片段,将其置于滤纸上,加上标记探针。因为探针只与它的镜像结合,可以鉴定、识别DNA片段。...
...如是cDNA探针用前需进行变性处理,载片法时将切片在空气中晾干,加含探针的杂交液10μl于切片上,盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜,3H标记探针每10μl杂交液含1×105cpm探针,32P或35S标记探针每10μl杂交液含5×...
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