...探针可以用放射性核素标记,结合了放射性核酸探针的菌落集团可用放射性自显影(auroradiography)法指示出来,核酸探针也可以用非放射性物质标记,通常是经颜色呈现指示位置,这样就可以将含有目的序列的菌落挑选出来。三、PCR法PCR技术...
...标记的探针杂交,再与包被在葡聚糖珠上的另一互补寡核苷酸(与标记探针互补的位置不同)杂交、检测。该方法同一般杂交检测技术相比,特异性要高出许多。TAS主要特点是扩增效率极高,由于拷贝数是以10指数递增,只有6个循环,靶序列即能达到2×106个...
...水平检测DNA/mRNA等一定碱基序列的核酸存在与否,Gall(1969)等建立了原位杂交方法(详见第二十章 )。在检测某种特定的蛋白质在哪一类细胞内合成时,常常应用连续切片或镜影切片,原位杂交法显示合成该蛋白质的mRNA,ICC法染色其...
...近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,...
...探针的杂交过程无阻碍作用;⑤固定液本身对杂交信号无遮蔽、掩盖作用,如不使本底增加等;⑥理化性质稳定、价格低廉。1.4%多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)配法:称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器(烧杯...
...IgE和IgG4(以下只用IgE代表)是介导Ⅰ型变态反应的抗体,因此检测血清总IgE和特异性IgE对Ⅰ型变态反应的诊断和过敏原的确定很有价值。一、总IgE的测定(一)测定方法正常情况下血清IgE仅在ng/ml水平,用常规测定IgG或IgM...
...免疫金银技术(Immunogold—sliver Technique)是在免疫金基础上发展的新兴的先进的免疫细胞化学检测技术,它比免疫荧光,免疫酶标技术有许多独特的优点。1.制备方法简单,易行。2.标记简单抗体、凝集素、酶、SPA、激素等...
...实验表明可检出102CFU淋球菌。研究证明隐蔽质粒中CPPB基因序列在所有的淋球菌染色体中(包括不含该质粒的菌株)。因此CPPB基因探针具有良好的特异性和敏感性。Torres等用CPPB基因探针检测了201份临床标本,采用非放射性地高辛标记...
...μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。(4)酶呈色反应。BRAB法和LAB示是Guesdon及其同事们(1979)建立的,由于这二种方法都需以生物素标记第一抗体,应用不如ABC法普遍。但用于免疫细胞中免疫球蛋白的显示具有...
...SPA菌体作为载体,结合特异性抗体成为一种吸附原,作协同凝集剂,用于某些细菌和病毒的定群和分型(详见第二章 第三节 )。4.可作为一种研究免疫复合物、膜抗原、膜受体和膜Ig的固相吸附剂 Hallgsen用同位素标记SPA测定血IgG的凝集物...
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