核酸外切酶 (exonuclease)在 核酸 水解酶 中,是具有从 分子 链的末端顺次水解 磷酸二酯键 而生成单 核苷酸 作用的酶,与 核酸内切酶 相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′- 单核苷酸 的酶,及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有 蛇毒磷酸二酯酶 及 大肠杆菌核酸外切酶 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等;后者有 脾脏 磷酸二酯酶 、 嗜酸乳杆菌 (...
核酸外切酶 (exonuclease)在 核酸 水解酶 中,是具有从 分子 链的末端顺次水解 磷酸二酯键 而生成单 核苷酸 作用的酶,与 核酸内切酶 相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′- 单核苷酸 的酶,及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有 蛇毒磷酸二酯酶 及 大肠杆菌核酸外切酶 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等;后者有 脾脏 磷酸二酯酶 、 嗜酸乳杆菌 (...
原位杂交术(in situ hybridization)是一种核酸分子杂交技术,它是通过检测细胞内mRNA和DNA序列片段,原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基 图1-11 大 鼠肝 大部切除后再生过程中增殖期肝细胞 摄取 3 H标记的胸腺嘧啶核苷放射自显影像 ↑ 增殖期肝细胞核 因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点,应用已知碱基...
将从 病毒 毒粒或 病毒感染 的 细胞 抽提分离的病毒 核酸 实验性地导入细胞,若都启动 病毒复制 循环,产生 子代 毒粒,此种病毒核酸称为 感染性核酸 ,否则称为非感染性核酸。 感染性核酸 (infectious nucleic acid)是由病毒 质粒 (或者 感染 细胞)中所分离出的具有 感染性 的核酸。通常,它的 感染率 远比完整病毒质粒为低,但感染...
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
核酸内切酶 (endonuclease)在 核酸 水解酶 中,为可水解 分子 链内部 磷酸二酯键 生成 寡核苷酸 的酶,与 核酸外切酶 相对应。从对 底物 的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶; 脾脏 RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶。如链孢霉(Neurospora)的 核酸酶 就是既分解DNA又分解RNA的酶。一般来...
此法是在亚硫酸盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基,使生物素结合到DNA分子上而制成生物素化DNA探针。此法优点是采用通用试剂和技术,检出敏感。Vicied 等人指出DNA和RNA中胞嘧啶N-4位置在亚硫酸氢盐存在下可用乙二胺连接臂修饰,此过程也可能介导C-6位的磺酸盐组分。在合适的条件下,可有3%~4%的碱基被修饰。新鲜配制亚硫酸氢钠-乙...
分子量 (molecular weight), 分子 中各原子的原子量总和。按已知的分子式和原子量就可算出 分子量 ,例如,氮气的分子式是N 2 ,N的原子量是14.00674,那么氮气的分子量等于2×14.00674=28.01348。分子量和原子量一样,也是相对比值,没有单位,如果指定以克为单位,则为 克分子量 。 有些物质不以 分子形式 存在,如 氯化...
分子量 (molecular weight), 分子 中各原子的原子量总和。按已知的分子式和原子量就可算出 分子量 ,例如,氮气的分子式是N 2 ,N的原子量是14.00674,那么氮气的分子量等于2×14.00674=28.01348。分子量和原子量一样,也是相对比值,没有单位,如果指定以克为单位,则为 克分子量 。 有些物质不以 分子形式 存在,如 氯化...
...探针一般较寡核苷酸探针特异性强,复杂度也高,从统计学角度而言,较长的序列随机碰撞互补序列的机会较短序列少,克隆探针的另一优点是,可获得较强的杂交信号,因为克隆探针较寡核苷酸探针掺入的可检测标记基因更多。但是,较长的探针对于靶序列变异的识别能力又有所降低。对于仅是单个碱基或少数碱基不同的两序列,克隆探针不能区分,往往杂交信号相当。这既是其优点,又是其缺点。优点...
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