免疫荧显微技术的基本原理是:使荧光抗体与标本切片中组织或细胞表面的抗原进行反应,洗涤除去游离的荧光抗体后,于荧光显微镜下观察,在黑暗背景上可见明亮的特异荧光。 (一)标本的制作 荧光显微技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。因此标本制作的好坏直接影响到检测的结果。在制作标本过程中应力求保持抗原的完整性,并在染色、洗涤和封埋过程中不发...
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten –Coupled techni...
...重复上述过程15次。最后将反应管置65℃水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的DNA探针特异性高,敏感性好,可测出的最低靶DNA量为10fg,利用PCR还可以作D...
...(V/V)甲酰胺溶于4×SSC预热37℃15~45min 。 (11)杂交:将载片上过量的甲酰胺液倾去,加20μl杂交混合液(含放射性同位素标记的探针量为5×10 3 ~ 10 6 cpm/每张载片)。覆以硅化的盖玻片,置于盛有少量5×SSC的硬塑料盒内以保持湿度,42℃孵育12~18h。为使载片不致于浸泡于SSC溶液内,通常以二根玻管(或棒)扎成担架状,载...
...。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。 图5-2 蛋白最适稳定量示意图 (2)目测法:以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例,将标记的蛋白质逐级稀释后(由5μg~45μg另设对照管),各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中,5min后,在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠,依表5-5顺序进行。 表5-5 具...
此法标记原理如下图所示: 标记的HRP部分催化底物化学发光反应:氨基苯二甲酰肼 氨基苯二甲酸 +N 2 +光→X-光片上感光10~20min显定影。 光亮子在酚、萘及胺类等增强剂促进下,而使光亮增强。 这种方法就是利用特殊的酶底物,氧化后把产生的能量转变为光能放出,称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂,经增强剂将光能放大,在X光片上显示杂交信号...
染色体断裂 chromosome break 染色体 的臂出现裂开,若裂开的间距小于臂的宽度,称为 裂隙 (gap);大于臂的宽度称为断裂,断裂后不带着丝的部分称断片。断片在细胞分裂过程中,由于不具有着丝粒,不能定向移动而常丢失。带有 着丝粒 部分的断端有很强的粘合性,可以与其它染色体的断端相互连接,形成各种类型的畸变。因此,断裂是各类 结构畸变 的始因。 ...
...铁约占23%的蛋白质,分子量460kD,直径10~12μm。抗体与铁蛋白通过低分子量的双功能试剂结合为一种双分子复合物。此复合物既保留抗体的免疫活性,同时因为铁蛋白含有致密的铁离子核心,铁胶粒直径核心为55~60nm含2000~3000个铁原子,分布于四个区域,形成四个圆形致密区,具有很高的电子密度,便于电镜观察。铁蛋白来自许多动物,以肝、脾含量较高,其中马...
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten ?CCoupled techn...
序列标志 位点 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是对以特定对 引物 序进行PCR特异 扩增 的一类 分子 标记的统称。通过设计特定的引物,使其与 基因组 DNA序列中特定结合位点结合,从而可用来扩增基因组中特定区域,分析其 多态性 。利用特异PCR技术的最大优点是它产生信息非常可靠,而不像RFLP和RAPD那样存在某种模糊性
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