以生物素标记抗体作第一抗体,酶标记抗生物素作为第二抗体(图6-3)。操作步骤如下: 图6-3 LAB技术 (1)切片在含有25~50μg/ml生物素标记抗体(PBS液稀释)中孵育1h,室温。 (2)PBS洗2次,每次5min。 (3)用20~50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。 (4)酶呈色反应。 BRAB法和LAB示是Guesdo...
...加重蒸水6μl,10×Buffer1μl,DNA 2μl,酶1μl,混匀,37℃水浴1h以上。 (2)取反应物点样,观察酶切效果。 (3)酶切完全后,70℃5min终止反应。 2.琼脂糖电泳 (1)配制所需浓度琼脂糖凝胶。 (2)在待测的DNA样品中加1/5体积的溴酚蓝指示剂,混匀后点样。 (3)打开电源开关,5V/cm电泳。 (4)在UV灯下观察电泳结果。
...利用HO/CA 3 双染色还可分析DNA的碱基组成。还可以结合Brdu (Bromodeoxyuridine, 溴脱氧尿嘧啶核苷)单克隆抗体免疫荧光来测定细胞内DNA合成。 2.蛋白质总量测定 用FCM可以测定细胞中蛋白的总含量,以检测一个细胞群体生长和代谢的状态,或区别具有不同蛋白含量的细胞亚群,如血液中的白细胞的分类。检测总蛋白的常用荧光探针为异硫氰基荧...
该技术方法是用生物素分别标记抗体和酶,然后以抗生物素为桥,把两者连接起来(图6-2)。 图6-2B RAB技术 检查抗原时,先用生物素标记的抗体与细胞(或组织内)的抗原反应,洗去未结合的抗体,加入抗生物素孵育后,洗去未结合的抗生物素,再加入已标记酶的生物素孵育,洗片,以细胞化学方法呈色反应。
...份多,则Giemsa染料不易与其结合,结果成淡染,由于整条染色体上A/T和G/C的分布不匀,这样在染色体上呈现出深浅不一的条纹或者称带纹,该技术用Giemsa染色,故其带型称为G带。 2.操作过程 (1)按常规染色体技术制片。 (2)制好的染色体玻片,在80℃烘箱中,烘烤2h,置于室温。 (3)4℃冰箱PBS液5min。 (4)4℃冰箱PBS缓冲液含胰蛋白酶...
...糖胺聚糖)与核心蛋白质构成的共价化合物。其中氨基聚糖可分为透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫 酸角 质素、肝素和硫酸乙酰肝素等。 真皮纤维化是以胶原为主的细胞外基质成分在真皮中过度 积聚 的结果。它既见于 硬皮病 等皮肤病中,还见于皮肤 创伤 愈合过程中发生的肥厚性瘢痕和 瘢痕疙瘩 中。现将免疫细胞化学技术在上述常见的真皮纤维化性疾病研究中的应用简介如下:
...糖胺聚糖)与核心蛋白质构成的共价化合物。其中氨基聚糖可分为透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫 酸角 质素、肝素和硫酸乙酰肝素等。 真皮纤维化是以胶原为主的细胞外基质成分在真皮中过度 积聚 的结果。它既见于 硬皮病 等皮肤病中,还见于皮肤 创伤 愈合过程中发生的肥厚性瘢痕和 瘢痕疙瘩 中。现将免疫细胞化学技术在上述常见的真皮纤维化性疾病研究中的应用简介如下:
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ,近年来,凝集素电镜标记技术应用日益广泛,且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多,常用的有凝集素—酶(常用为HRP)、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术(包埋前染色)简介如下(Sterit 和Kreatzberg,1987)。 (1)固定:常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织,...
通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法: 1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。 2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。 3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞...
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