一、抗血清的制备
样品的正确收集与处理,是蛋白质及多肽激素放射免疫分析取得成功的前提。不同的样品与测定项目,其前处理有不同的要求。下面以神经肽测定为例,介绍样品的前处理方法。
荧光抗体是免疫荧光细胞化学的重要技术之一,制备高特异性和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高特异性高效价的免疫血清。
核酸是生物体内的高分子化合物,包括DNA和RNA两大类。
...提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段,在严格的杂交条件下,可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此,寡核苷酸探针的研究,对于提高核酸杂交技术的特异性和敏感性,扩大应用范围有重要意义。 常用的寡核苷酸探针有3种:①特定序列的单一寡核苷酸探针;②较短的简并性较高的成套寡核苷酸探针;③较长而简并性较低的成套寡核苷酸探针。多用 32 P标记寡核苷酸探针,...
常把需研究的 基因 称为目的基因,需分析的基因称靶基因,在基因克隆过程中有时两者均称为插入基因,有时三者含义相近。简单的 原核生物 目的基因可从 细胞核 中直接分离得到,但人类的基因分布在23对 染色体 上,较难从直接法得到。简短的目的基因可在了解 一级结构 或通过了解 多肽 链一级结构 氨基酸 编码的 核苷酸序列 基础上人工合成。但多数的目的基因由mRNA...
...含的SPA在免疫学性质上相似,但易分离,损失少。 (2)SPA为蛋白质成分,仅含少量或不含碳水化合物,其分子量因提取方法不同而异,用脱氧核糖核酸酶消化细胞壁后超速离心或用加热油提法,所测分子量为12000~15000。用沉淀平衡分析和在6mol/L鸟嘌呤盐酸盐中凝胶过滤,测出分子量为42000。SPA为多肽单链,内含3个高度相似的Fc段结合区,每区由50个以...
聚合酶链反应(polymerasechain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品,因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及...
(一)直接检出病毒核酸 1.标本滴加到硝酸纤维素膜上,病毒DNA结合到膜上,在原位进行硷变性处理后,有放射标记的已知病毒DNA片段杂并,两条单股核酸按硷基到补原则结合成双股,经放射自显影,阳性结果出现斑点状杂交信号。含轮状病毒的粪便标本经热变性处理,点到膜上,使用轮状病毒体外转录的放射标记探针做斑点杂交,敏感性高于ELISA。肠道病毒也可用互补的DNA探针做...
(一)DNA探针 DNA探针是最常用的核酸探针,指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获的DNA探针种类很多,有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和 人类 细胞DNA探针,这类探针多为某一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的毒力因子基因探针和人类ALU探针,这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。...
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