取1g RB200及PCL52g放在乳钵中研磨5min(在通风橱中)。然后加入10ml无水丙酮,放置5min,不断搅拌。过滤,用滤液进行标记抗体。剩余部分吸附在滤纸上,4℃干燥保存。 取抗体(20mg/ml)每毫升加入生理盐水和0.5mol/l pH9.0的碳酸盐缓冲液各1ml稀释。逐滴加入0.1ml RB200溶液,边加入边搅拌,在0~4℃中结合12~18...
在材料中引入标记质。可以简化混合物中包含成分的辨别工作。而且使有 标记物 的运动和过程的追踪更加容易,可当作标记物的物质类类型有,铁磁物质。普通的和发光的油漆,有强烈气味的物质,等等。
自旋标记 spin label 自旋标记 spin label 很多物质的 分子 不表现 电子自旋共振 (ESR),但对这些分子,人工地使之与 自由基 (free radical)结合从而得以用ESR法来研究,获得独特的ESR信息,这就是 自旋标记法 。因自由基有不成对电子自旋,所以称自旋标记(H.M.McConnell)。开始是用 氯丙嗪 阳离子自由基研究...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下: (1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 (2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。 (3)在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
不论使用何种制备方法,要获得合格的标记化合物,都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外,一些标记化合物,经过一定时间的存放后,往往会出现不纯物,而需再纯化。如碘标记生长激素( 125 --HGH),在刚标记的第2天,从Sephadex G-100过滤谱上可见,几乎所有的碘化HGH都集中在峰II;保存1个月后,峰II组份减少,峰I和峰III成分明显增加,峰I是...
(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。 (2)应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。 (3)防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。 (4)检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫...
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
...7.4缓冲液,22℃,25min,同上过Sephadex G-50,收集蛋白A峰。 (3)取0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml蛋白A等量混合,22℃反应6h,混合物4℃保存备用。 以上两种PE标记制品,可最后溶于0.01mol/l pH7.4PB(含有0.1mol/l DETA、1mol/L碘乙酰胺、1%BSA 和0.1%NaN3),0~5℃保存。
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