...BS pH7.4洗涤5～10min共洗3次。抗体染色方法有直接法、间接法、补体法： （1）直接法：标记抗体直接于组织中进行抗原结合反应，用于鉴定未知抗原。 优点：①结果判定简单；②特异性强，因反应过程中只有两个因素，与抗原交叉反应较少。 缺点：①不能鉴定未知抗原；②一种标记抗体只能检测一种抗原；③敏感性差。 （2）用已知未标记抗体与未知抗原相互结合或用未知抗...
....0 0.08 6～10 5.1±1.1 0.20 4～6 6.7±1.2 0.27 1985年Teffreys等将“DNA指纹”应用于法医鉴定。他们从血斑、精斑或新鲜毛发根部抽提微量DNA后作印迹杂交。从4年前的精斑、血斑样品中仍能提取出来未降解的DNA，特别是设计出一些方法可从妇女阴道分泌物中，把混在里面的精子分离出来。从中提取DNA后可明确无误地鉴定谁...
（一）质粒DNA的提取及鉴定 1． （1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。 （2）将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中，用台式离心机于4℃以12000g离心5min，将剩余的培养物贮存于4℃。 （3）吸尽培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。 2．碱裂解法小量抽提质粒 （1）将细菌沉淀...
含重组质粒的细胞菌落常用的鉴定方法有：①小规模制备质粒DNA进行限制酶切分析；②α互补；③插入失活；④杂交筛选。下面简要介绍小规模制备质粒DNA进行限制性酶切分析。小规模制备质粒DNA可用天美等公司的Wizard Minipreps DNA试剂盒或采用下述方法： 1.挑取一些独立的转化菌落进行小规模培养，用无菌牙签或挑种环挑取单菌落于2ml含有相应抗生素的L...
一、抗血清的鉴定 动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。 （一）双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性 按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物（如抗原来自动物血清则放相应的混合血清）和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散18～24h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若与粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融...
血液的温度为37摄氏度，比重为1.050-1.060，红细胞的比重为1.090，血浆的比重为1.025-1.030。血液也是有粘稠度的，即血液在血管内流动的粘滞力，主要取决于红细胞的数量和血浆蛋白的浓度。全血的相对粘稠度为纯水的4-5倍；血浆为1.6-2.4倍；血清粘稠度为1.5倍。血液的PH值为7.5-45，静脉血因含较多的二氧化碳，PH较低，接近7.35
...血清蛋白区带电泳和免疫球蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白的异常增高和其含量的多少，但是增高的M蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫扩散。 （一）免疫电泳 免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。血清标本先经区带电泳将各种蛋白成分分离开，继而用各种特异性抗血清进行免疫扩散，根...
...目的序列的插入，所以需要做进一步细致的筛选。 二、 核酸 杂交法 利用标记的核酸做 探针 与转化细胞的DNA进行 分子杂交 ，可以直接筛选和鉴定目的序列克隆。常用的方法是将转化后生长的菌落复印到 硝酸纤维膜 上，用碱裂菌，菌落释放的DNA就吸附在膜上，再与标记的核酸探针 温育 杂交，核酸探针就结合在含有目的序列的菌落DNA上而不被洗脱。核酸探针可以用 放射性...
信号转导的结果是细胞核内一些转录因子同DNA上某些特定的序列结合，调节转录活性和基因的表达水平。因而分离鉴定细胞内核转录因子在信号转导研究中具有独特的意义。根据核转录因子可与一些特定的核甘酸序列结合的特点，将其特定的核苷序列标记上同位素，来鉴定信号转导中的核转录因子。核转录因子具有一些特征性的结构域，即亮氨酸拉链（lucine zipper）、锌指结构（zi...
...在信号传递过程中发挥重要的作用。一些信号蛋白结构中含SH-2结构域可同某些磷酸化的酪氨酸残基相结合，使信号得以逐级传递。含酪氨酸磷酸化的蛋白鉴定通常是首先分离粗提蛋白，采用针对含这些氨基酸残基磷酸化蛋白的单克隆抗体进行免疫沉淀 （immunoprecipitation），SDS-PAGE电泳，然而采用Western blotting及immunoblotti...
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