...从生物组织细胞提取出全部DNA,用物理方法(超声波、搅拌剪力等)或酶法(限制性核酸内切酶的不完全酶解)将DNA降解成预期大小的片段,然后将这些片段与适当的载体(常用噬菌体、粘粒或YAC载体)连接,转入受体细菌或细胞,这样每一个细胞接受了...
...培养细胞经促细胞分裂剂刺激,核内DNA开始合成G0期,到最大增殖期(S期),细胞核特异的出现DNA的复制,利用这一特点,制成抗原DNA聚合酶S的辅助蛋白。取培养细胞或人末稍血淋巴细胞经PHA,ConA刺激后涂片,间接免疫荧光检测。结果可...
...DNA含量分析技术是80年代以来迅速发展的一门新型检测技术,已广泛应用于肿瘤临床及基础理论的研究。其中流式细胞术(Flowcytometry,FCM)是一种快速定量分析细胞核DNA含量的技术,其在推测患者预后及治疗反应上具有重要的价值[1...
...DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)是随机水解双链或单链DNA的一种内切酶,使DNA分子降解成带有5’磷酸末端的单核苷酸和寡核苷酸的混合物:在进行重组DNA研究时,必须注意防止DNA酶的污染,否则制备的DNA样品将会降解。因此器皿或试剂高温处理,...
...,可以抑制病毒的DNA多聚酶和逆转录酶的活性;并与核苷酸竞争性掺入病毒的DNA链,终止DNA链的延长和合成,使病毒的复制受到抑制而发挥抗病毒作用。治疗慢性乙肝的核苷类似物主要有下面几种: ■拉米夫定(Lamivudine) 为近年新合成的二...
...一、质粒DNA的提取及鉴定(一)质粒DNA的提取及鉴定1.(1)将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中,接入一单菌落,于37℃剧烈振荡培养过夜。(2)将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中,用台式离心机于4...
...由于DNA提取方法的改善和DNA质量的提高,几乎所有基因分析的技术均可用于石蜡包埋组织,但目前分子病理学研究的常用方法是点杂交、Southern印迹杂交和多聚酶链反应(PCR)。1.点杂交鉴于包埋组织DNA有一定程度的降解,因而点杂交被...
...松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制,一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制,一个细胞可复制30-50个质粒,如果用氯霉素可阻止蛋白质合成,使质粒有效利用原料,复制更多的质粒。质粒经过改造品种繁多,常用的有pBR322、...
...这种认识是不全面的。第一,有一小部分“小三阳”患者,其乙肝病毒DNA仍然阳性,提示病毒复制仍然活跃,且有可能是乙肝病毒发生变异的结果,患者的病情可能较重和发展更快,应加以注意。第二,无论患者是“大三阳”还是“小三阳”,如果肝功能正常,又没有...
...DNA双螺旋结构模型,不仅与其生物功能有密切关系,还能解释DNA的重要特性枣变性与复性,这对于深入了解DNA分子结构与功能的关系又有重要意义。1.DNA变性(denaturation)指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的...
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