... – protein A)嵌合体作为中介物。它具有双特异性结合能力,一端为链霉亲和素,可结合生物素;另一端为可与IgG的Fc段结合的蛋白A。这样可特异地把生物素化的DNA分子和抗原-抗体复合物连接在一起。选用BSA作抗原进行免疫PCR实验,...
...加入适量的放射性或生物素标记的NTP,则所合成的RNA可得到高效标记。该方法能有效地控制探针的长度并可提高标记物的利用率。值得一提的是,通过改变外源基因的插入方向或选用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的转录方向,即以哪条DNA链以模板转录RNA...
...。三、凝集素在免疫细胞化学中的应用凝集素可为荧光素、酶和生物素等所标记,分别进行下列染色法:1.直接法 标记物直接标记在凝集素上,使之直接与切片中的相应糖蛋白或糖脂相结合。(1)切片脱蜡至水。(2)凝集素标记物(100μg/ml),室温,...
...1.酶分子化学修饰的概念酶分子肽链上的某些基团可在另一种酶的催化下发生可逆的共价修饰,从而引起酶活性的改变,这个过程称为酶的酶促化学修饰(chemical modification)。如磷酸化和脱磷酸,乙酰化和去乙酰化,腺苷化和去腺苷化,...
....标记液△:生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP※:为检测标记率而加。2.转录标记终止液(1)0.2mol/L EDTA:用于地高辛标记法(2)生物素标记终止液:(四)DNA探针标记常用试剂的配制(1)10 ×缺口平移缓冲液...
...streptavidin – protein A)嵌合体作为中介物。它具有双特异性结合能力,一端为链霉亲和素,可结合生物素;另一端为可与IgG的Fc段结合的蛋白A。这样可特异地把生物素化的DNA分子和抗原-抗体复合物连接在一起。选用BSA作抗原进行免疫...
...离子交换、电泳等方法,兹不赘述。分离纯化后的每条肽链还要进一步分析其末端。2)末端分析 其方法较多,这里我们只介绍较常用的几种。(1)N-末端测定A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB):1945年Sanger提出此方法,是他的重要贡献之一。...
...细胞表面糖;用标记抗体可测表面抗原;用标记多聚阳离子可检测细胞表面电荷;用标记的激素、生长因子、神经递质和病毒等可检测细胞受体;用标记的大分子、微生物等可检测细胞的内吞性;用荧光素标记的亲和素以及带有DUTP的生物素衍生物的DNA探针跟靶细胞...
...常用的探针标记法是缺口平移法(nicktranslation),其原理如图13-1。首先用适当浓度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探针DNA双链上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,...
...translation),利用此反应可在体外对DNA片段进行放射性磷(α-32PdNTP)的标记制成探针(probe),进行核酸的分子杂交实验,是现代分子生物学的一项重要技术(图16-11)。 图16-11 缺刻平移标记DNA探针许多实验证实DNA ...
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