...严密的方案,借助工具酶的作用,将目的基因或序列以适当的连接方式插放载体,用转化、感染或转染的方法导入宿主细胞繁殖,经抗药生长、呈色显示,核酸分子杂交、PCR、免疫学亲和结合或限制性酶谱分析等方法筛选获得克隆,最后要经过核酸序列分析鉴定。克隆...
...两个不同遗传类型的水稻品种杂交产生的杂交种子播种后长成的水稻。根系发达,茎秆粗壮,生长旺盛,穗大粒多,具有明显的杂种优势。但杂交种子只能利用第一代,第二代开始产量下降,因此需要年年制种。...
...HCl 含(0.1mol/L甘氨酸)pH7.410min。孵育在2×SSc 10min。2.探针准备35pmol的寡核苷酸(oligo -)探针,3’ 终末标记以地高辛-11–dUTP。3.预杂交和杂交加约300μl预杂交液(配制法见附录)在...
...分子量DNA71.4±14.53μg,与新鲜组织产量相当(70.4±13.76μg)。酶切、电泳和杂交反应亦相同于新鲜组织。提示AMex法是一种多用途组织处理技术,可以克服由于DNA降解、高分子量DNA减少和内切酶不完全消化所产生的电泳类型...
...dTTP标记,因mRNA的多聚(A)尾而影响杂交特异性。寡核苷酸探针多用于核酸“点”突变检测,该探针可用核酸合成仪人工合成。克隆探针一般较长,特异性图18-5 DNA随机引物标记法好,标记量大,杂交检出信号强。合成探针长度短,一般在20-50...
...一些从不吸烟的人为何也会患肺癌?美国和日本的科研人员在最新研究中发现,这可能与一种被称为miR-21的微RNA(核糖核酸)分子有关。 微RNA分子是能调节基因表达的一种小分子,目前已发现超过250种,其中多种与癌症有关,miR-21正是...
...敏感性为100%,特异性为92.4%。与细胞培养法比较,其符合率为96.7%。DIBA适用于大批量标本的检测,但结果需3天。 6.核酸探针 随着分子生物学技术的发展,DNA杂交技术已进入衣原体检测领域。以82S标记7Md质粒制备的探针,检出...
...酸性物质组成的,此酸性物质即是现在所知的核酸(nucleic acid)。1944年Oswald Avery,Colin Macleod和Maclyn McCarty发现,一种有夹膜、具致病性的肺炎球菌中提取的核酸桪NA(...
...由于DNA提取方法的改善和DNA质量的提高,几乎所有基因分析的技术均可用于石蜡包埋组织,但目前分子病理学研究的常用方法是点杂交、Southern印迹杂交和多聚酶链反应(PCR)。1.点杂交鉴于包埋组织DNA有一定程度的降解,因而点杂交被...
...Forstboefel等用该基因的已知编码DNA序列,从一死婴尸检组织中得到的DNA进行选择性PCR扩增。结果发现DMD基因的一关键部分缺失,进而证实了DMD的诊断。同样可通过亲代DNA分析,区分遗传性或散发性缺失。4.病理微生物的检测核酸杂交和...
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