...。由于引物的高度选择性,细胞总RNA无需进行分级分离,即可直接用于RNA的PCR。但RT-PCR对RNA制品的要求极为严格,作为模板的RNA分子必须是完整的,并且不含DNA、蛋白质和其它杂质。RNA中即使含有极微量的DNA,经扩增后也会出现非特异性扩增;蛋白质未除净,与RNA结合后会影响逆转录和PCR;残存的RNase极易将膜板RNA降解掉。硫氰酸胍(GaS...
...1.2ml PB、pH6.8 混合,装入透析袋置入50mmol/l pH6.8 PB中透析,4℃过夜,再换用pH7.5PB透析6h。每个PE分子中可结合8个巯基。 2.PE-IgG制备异双功能试剂SPDP[n - Succ - inimdyl3-(2-pyridyldlthio) propinate ] 30μl (1.1mg/ml)的乙醇溶液,加入700μ...
不论使用何种制备方法,要获得合格的标记化合物,都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外,一些标记化合物,经过一定时间的存放后,往往会出现不纯物,而需再纯化。如碘标记生长激素( 125 --HGH),在刚标记的第2天,从Sephadex G-100过滤谱上可见,几乎所有的碘化HGH都集中在峰II;保存1个月后,峰II组份减少,峰I和峰III成分明显增加,峰I是...
...),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。Bio-11-Dutp/dTTP(%)比值为35%时,其标记率最高,显色灵敏度达0.2pg,杂交灵敏度为1~2pg。二步法缺口平移标记HBv DNA探针,其灵敏度低于随机引物标记。Mackeg等(Focus,1992;14:21)证实了用随机引物标记探针具有放大的效应。随机引物中加入一定比例的dTTP,能增加H...
肽核酸结构。 肽核酸 ( Peptide nucleic acid ; PNA )是一种与 DNA 和 RNA 相似的 化学 物质,可经由人工合成制造,用来作为 生物学 研究或是医学治疗。地球上已知的生物并未发现任何体内拥有PNA的个体。 PNA的骨架是由重复排列的N-2-(氨乙基)- 甘氨酸 (N-(2-aminoethyl)-glycine)单位,经由 ...
锁核酸 ( Locked nucleic acid , LNA )是一种经过修饰的 RNA ,LNA中一部分 核糖 上的2'与4'碳连结在一起。一般可见于A- DNA 或RNA。 这类 核酸 可以增加 引子 或 探针 (probe)的 融解 温度(Tm值),加强这些实验用物质的稳定性,可应用在即时 聚合酶连锁反应 (real-time PCR)等技术中。 参...
核酸结构 ( 英语: Nucleic acid structure )是指如 DNA 与 RNA 的 核酸 结构 。从 化学 角度上讲,DNA与RNA是非常相似的。DNA与RNA常分为四种不同水平:一级、二级、三级及四级。 能够直接计算出DNA机械性质的实验技术相对较新,且要再溶液中进行高分辨率观察也较困难,不过科学家仍然解出了许多关于DNA机械性质的数据。...
苏糖核酸 ( Threose nucleic acid , TNA )是一种与 DNA 和 RNA 相似的 化学 物质,但组成物有所不同。地球上已知生物并未发现体内有此物质。 TNA的骨架是由重复排列的 苏糖 (threose)单位,经由 磷酸酯 键连结而成。在实验室中,可利用 DNA聚合酶 合成出DNA与TNA的混合长链。 外部连结 Was simple ...
(1)取0.01%HAuCl 4 上水溶液100ml,加热至沸腾。 (2)加入40μl 195 Au。 (3)迅速加入4ml1% 柠檬 酸三钠水溶液,5~7min出现透明的橙红色。 (4)其含量为I×10 6 脉冲数/min。 (八)微波制备液体金方法。
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