...核酸序列,已广泛应用于临床检验和科学研究。Leary等(1983)用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。Forst等(1985)发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法,使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进...
...低(约1ng的靶核酸),仅适用于检测扩增的靶序列,如rRNA或PCR扩增产物。3.液相夹心杂交(1)亲合杂交:在靶核酸存在下,两个探针与靶杂交,形成夹心结构,杂交完成后,杂交物可移到新的管或凹孔中,在其中杂交物上的吸附探针可结合到固相支持物...
...探针杂交的“发夹”状结构。(4)避免单一碱基的重复出现。(5)一旦选定某一序列符合上述标准,最好将该序列与核酸库中的核酸序列比较,探针序列应与靶序列核酸杂交,而与非靶区域的同源性不应超过70%或有连续8个或更多的碱基的同源。否则,该探针不能...
...检出序列中点突变而设计、发明的。合成一对引物A、B,它们完成覆盖了靶序列。经退火与靶序列结合后,A、B间留下一个缺口(nick),加入连接酶封闭缺品,两引物成靶序列完整的互补链。如果靶序列中有点突变,引物不能与靶序列精确结合,缺口附近核苷酸...
...DNA上而不被洗脱。核酸探针可以用放射性核素标记,结合了放射性核酸探针的菌落集团可用放射性自显影(auroradiography)法指示出来,核酸探针也可以用非放射性物质标记,通常是经颜色呈现指示位置,这样就可以将含有目的序列的菌落挑选出来。...
...1.二级结构1953年Watson 及Crick在化学分析及X光衍射法观察DNA结构的基础上提出了著名的DNA双螺旋结构模型(double helix model)此结构是在核酸一级结构基础上形成的更为复杂的高级结构,即DNA的二级结构,...
...226个氨基酸残基,且彼此同源。每条肽链由含半胱氨酸残基的一个短的N末端区所组成,接着为一段81个氨基酸的胶原序列(即重复的三股序列Gly-X-Y,Y处通常为羟脯氨酸或赖氨酸残基)。该序列的其余部分为非胶原性的。A、B链间及两条C链间各有一个...
...的联系正是生命“活”的本质所在。凭借基因工程人们可以克隆获得天然的或任意设计的核酸序列,可以大量获得过去难以得到的生物体内极微量的活性蛋白质、可以设计获得任意定点突变(site-directed mutagenesis)的基因和蛋白质,这就...
...增强子,并存在着对细胞因子特别是IFN-γ应答的核苷酸序列。在MHc Ⅱ类基因中含有对于Ⅱ类基因表达所必需的、称之为W(或H)、X和Y盒的三个保守的核甘酸序列。图6-11 MHc Ⅰ、Ⅱ类基因外显子内含子结构IFN-γ可调节MHC I类和Ⅱ...
...纯化 五、探针制备 第三节 分子生物学实验诊断技术 一、核酸杂交技术 二、核酸扩增技术 三、核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析 四、核酸一级结构(核苷酸序列sequence)分析 第四节 诊断分子生物学技术的临床应用 第十九章 临床...
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