生物素标记的核苷酸是最广泛使用的一种,如生物素-11-dUTP,可用缺口平移或末端加尾标记法。实验发现生物素可共价连接在嘧啶环的5位上,合成TTP或UTP的类似物。在离体条件下,这种生物素化dUTP可作为大肠杆菌多聚酶I(DNA酶I)的底物掺入带有缺口的DNA或RNA,得到生物素标记的核酸探针。这种标记方法称为缺口平移法。用标记在DNA上的生物素与链霉亲合素...
应用免疫细胞化学技术进一步研究LC表面受体或表面分子,以加深对LC功能特性的认识。通过单克隆体免疫细胞化学及RT-PCR(reverse transcriptase –ploymerase chain reaction ) 技术证实,新鲜分离的人LC能显示2种FcεRII:一种是膜相关型,可用单抗CD 12 检出;另一种为可溶性分泌型,可用RT-PCR证实。...
免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫浊度法,前者较为简便,后者更为准确迅速。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球蛋白的显着增高,大多在30mg/ml以上;而正常的免疫球蛋白,包括与M蛋白同类的丙种球蛋白的含量则显着降低。在良性丙种球蛋白病的血清标本中,M蛋白的升高幅度一般不象恶性丙种球蛋白病那么高,多在20mg/ml以下;M蛋白以外的免疫球蛋...
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ,近年来,凝集素电镜标记技术应用日益广泛,且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多,常用的有凝集素—酶(常用为HRP)、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术(包埋前染色)简介如下(Sterit 和Kreatzberg,1987)。 (1)固定:常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织,...
(一)标准氢电极 电极电位的绝对值是无法测定的,但可以选定一个电极作为标准,将各种待测电极与它相比较,就可得到各种电极的电极电位相对值。国际纯粹和应用化学协会(IUPAC)选定“标准氢电极”作为比较标准。 标准氢电极是氢离子浓度为1mol·L-1氢气的压力为101.325kPa的电极。国际上规定,298K 时,标准氢电极的电极电位为零。用符号 H +/ H2...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。
从本质上说,药物都是化学物质,其检测方法均为临床化学的常用技术。但体液中的药物大多以μg/ml或ng/ml水平存在,并且其检测不仅受同时存在的多种结构相似的内源性物质干扰,还受和原型药仅有微小差别的代谢物干扰。而某些药物的TDM除原型药外,还需同时检测具药理活性的代谢物。另一方面,药物的有效浓度范围和中毒水平,是结合大量临床观察确定的,要求任何实验室建立的测...
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
取1g RB200及PCL52g放在乳钵中研磨5min(在通风橱中)。然后加入10ml无水丙酮,放置5min,不断搅拌。过滤,用滤液进行标记抗体。剩余部分吸附在滤纸上,4℃干燥保存。 取抗体(20mg/ml)每毫升加入生理盐水和0.5mol/l pH9.0的碳酸盐缓冲液各1ml稀释。逐滴加入0.1ml RB200溶液,边加入边搅拌,在0~4℃中结合12~18...
生物素- 补骨脂 素是另一种生物素光敏物质,在长波长紫外线照射下与嘧啶碱基发生光化学反应,加成到DNA中,去除小分子后,得到生物素标记核酸探针。此法可标记单链或双链DNA或RNA,及寡核苷酸。灵敏度与放射性探针相当。标记方法:取DNA或片段0.5μg加50μlTE(pH8.0)缓冲液中,再加入5μlg生物素- 补骨脂 素,溶解后,置365nm紫外光下直接照射...
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