...原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行,而在未知致病基因时,则无法进行基因定位。放射性同位素标记核酸探针与染色体显带结合进行原位杂交仍有不少缺点和局限性。例如需要使用放射性同位素的特殊实验室,自显影曝光时间长,同位素标记的探针不易保存,放射污染...
...原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行,而在未知致病基因时,则无法进行基因定位。放射性同位素标记核酸探针与染色体显带结合进行原位杂交仍有不少缺点和局限性。例如需要使用放射性同位素的特殊实验室,自显影曝光时间长,同位素标记的探针不易保存,放射污染...
...,用一种称之为限制性核酸内切酶的酶,将其切成细小的节段。通过电泳技术,在凝胶中分离这些片段,将其置于滤纸上,加上标记探针。因为探针只与它的镜像结合,可以鉴定、识别DNA片段。...
...设计与 制备;靶基因的标记;芯片杂交与杂交信号检测。 基因芯片的设计实际上是指芯片上核酸探针序列的选择以及排布,设计方法取 决于其应用目的,目前的应用范围主要包括基因表达和转录图谱分析及靶序列中单 碱基多态位点(single ...
...原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的...
...液10μl于切片上,盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜,3H标记探针每10μl杂交液含1×105cpm探针,32P或35S标记探针每10μl杂交液含5×105cpm探针;如是漂浮切片,则用灭菌吸水纸将切片水份尽量吸干,然后入杂交液...
..., pH7.0)透析。(2)去除蛋白质中的沉淀:长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/ml的情况下,很容易形成聚合物,聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响,因此,标记之前须离心以除去这些聚合物。一般...
...在大肠杆菌T4噬菌体多聚核苷酸激酶(T4PNK)的催化下,将γ-32P-ATP上的磷酸连接到寡核苷酸的5’末端上。要求标记的寡核苷酸5’端必须带羟基。反应式为:此法适用于标记合成的寡核苷酸探针。如将底物改为Bio –11 –dUTP,也...
...原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的...
...高,被检样品极易被污染,样品纯化,扩增,检测区域应分开。房间应经常用紫外光照射。扩增物应定点丢弃,处理。三、核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析RFLP分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹(blot)技术、探针-杂交技术的综合应用,多用于...
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