...此法是在亚硫酸盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基,使生物素结合到DNA分子上而制成生物素化DNA探针。此法优点是采用通用试剂和技术,检出敏感。Vicied 等人指出DNA和RNA中胞嘧啶N-4位置在亚硫酸氢盐存在下可用...
...生物体内有些组织,如神经组织中的蛋白质,对带负电荷的核酸探针较易吸附。经该液乙酰化处理后,可使切片标本表现带上负电荷,有排斥带负电的核酸探针,减少非特异吸附,降低反应背景的作用。4.RNA酶溶液取RNA酶A溶解于100ml DEPC水中,分装...
...最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。...
...1.Forst AC, et al. Non- radioactivehybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with a ...
...1.Forst AC, et al. Non- radioactivehybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with a ...
...(一)概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础,在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是:制备DNA探针,标记探针,检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来...
...表12-52 实验动物器官中RNA和DNA含量[122]动物种类性别体重(克)动物数测定单位肝肾心肌脑脾RNA含量:大鼠160~20010毫克%磷142±1696±6.6大鼠180~20010干组织249±3.730.5±0.18大鼠...
...1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检测试剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上,用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20~25个核苷酸中标记一个地高辛甙元,然后用抗地高辛抗体的...
...DNA片段均参入了标记物,用此法标记的探针标记率高达97.4%。此法重复性好,简便、快速、特异、不要求模板DNA的纯度,可以大量制备。此法有普遍应用价值。标记方法如下:待标DNA模板1ng,50mmol/L KCl, 10mmol/L ...
...蛋白质对DNA分子的识别也发生了相应变化。一般说来,A-T丰富的DNA片段常呈B-DNA。采用乙醇沉淀法纯化DNA时,整个过程中,大部分DNA由B-DNA经过C-DNA,最终变构为A-DNA。若DNA双链中一条链被相应的RNA链所替换,会变...
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