...100~400nt为宜,过长则杂交效率减低。最近研究结果表明,寡核苷酸探针(16~30nt)能自由出入细菌和组织细胞壁,杂交效率明显高于长探针。因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针是组织原位杂交的优选探针...
...产量,嗣后,或采用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradientgel electrophoresis, DGGE)显示由基因编码胺基酸区DAN序列突变所致的单股DNA构象的多态性;或使用等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法(...
...特异性强的DNA片段棗HSV-I和HSV-Ⅱ,胸腺激酶的寡核苷酸探针和RNA探针进行分子杂交,可快速而灵敏地对HSV感染作出诊断。2.人巨细胞病毒(human cytmegalovirus,HCMV)是先天感染的主要病原。一次感染后终年潜伏...
...如前所述,由于核酸探针的种类和标记物的不同,在具体应用的技术方法上也各有差异,但其基本方法和应用原则大致相同。大致可分为:①杂交前准备,包括固定、取材、玻片和组织的处理,如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等;②杂交;③杂交后处理;④...
...连锁分析获得物理图的位置有助于遗传作图,同时通过连锁分析(部分有减数分裂的交换)又能指导物理作图,使基因定位更为精细。1.连锁分析检测基因突变指导遗传病的诊断 通过遗传连锁图可以在缺少任何生化或分子性质信息情况下对遗传病进行诊断。例如应用...
...Y= C+T表2列述了Manos等设计的寡核苷酸探针。公用混合探针序列选自HPVL1区中另一保守序列,可与 MY11和MY09引物产生的多种HPVL1 PCR扩增产物杂交:型特异探针只与相应HPV型有互补序列,用于检出的HPV分型。表2 ...
...变性、预杂交和杂交后,利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果并判断病原体的性质。基因探针技术操作比较复杂,加之同位素污染等问题,目前尚不能普及应用。近年来发展起来的地高辛标记的非同位素探针,从探针标记到杂交都很方便,只是价格昂贵,仍限于...
...水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的...
...放射自显影像↑ 增殖期肝细胞核因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点,应用已知碱基序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针(probe),与组织切片或细胞内的待测核酸(RNA或DNA片段)进行杂交,通过标记物的...
...一、特异性目的核酸(或基因)的制备核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备:(1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。(2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一...
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