在PCR反体系中dNTP终浓度高于50mmol/L会抑制Taq酶的活性，使用低浓度dNTP可以减少在非靶位置启动和延伸时核苷酸错误掺入，高浓度dNTPs易产生错误掺入，而浓度太低，势必降低反应物的产量。PCR常用的浓度为50～200μmol/L，不能低于10～15μmol/L。四种dNTP的浓度应相同，其中任何一种浓度偏高或偏低，都会诱导聚合酶的错误掺入，降...
核苷 (nucleosides)，原指来自 核酸 的 嘌呤 和 嘧啶 糖苷 （见苷），现已扩展至其他天然和合成的杂环 碱基 核糖 苷，也包括糖上的C 1 连接到杂环碱的氧原子或碳原子上的 化合物 。核酸中的 核苷 由嘌呤或嘧啶碱与核糖或 脱氧核糖 缩合而成。核糖 分子 中的碳原子(C 1 )与嘧啶分子中的氮原子(N 1 )或嘌呤分子中的氮原子(N 9 )之间...
核苷 (nucleosides)，原指来自 核酸 的 嘌呤 和 嘧啶 糖苷 （见苷），现已扩展至其他天然和合成的杂环 碱基 核糖 苷，也包括糖上的C 1 连接到杂环碱的氧原子或碳原子上的 化合物 。核酸中的 核苷 由嘌呤或嘧啶碱与核糖或 脱氧核糖 缩合而成。核糖 分子 中的碳原子(C 1 )与嘧啶分子中的氮原子(N 1 )或嘌呤分子中的氮原子(N 9 )之间...
...因分析最直接的第一手资料。目前DNA、RNA以及蛋白质的一级结构分析中，DNA的碱基序列分析方法多样、简单、快速。下面就M13噬菌体-双脱氧核苷酸（ddNTP）的DNA测序法介绍如下。 M13是单链DNA噬菌体，转染宿主菌体复制为双链增殖，又以单链形式透出菌体。把待测DNA重组插入双链M13复制型DNA中，经培养扩增，可分离得到单链M13DNA（含待测单链D...
1．缺口平移 该技术由Kelly等于1970年创立。其原理是首先用DNA酶在双链DNA探针分子的一条链上制造一些缺口（nick ）,缺口处会形成3’—羟基末端，这时再在大肠杆菌DNA聚合酶I的催化下将核苷酸残基加在3’－羟基上，同时，根据大肠杆菌酶DNA聚合酶I的5’→3’核酸外切酶活性，此酶将缺口5’侧核苷酸依次切除。其结果是在缺口平移（nick tr－a...
...（320～400μm）下，可与单链或双链核酸发生反应，反应主要在T上，C上也有一定程度的反应。光敏生物素的连接臂含6～12个碳原子，用以减少探针杂交时的空间位阻。光敏生物素标记核酸，方法简单，灵敏度也可达到pg水平，可用于外源基因的检测。最近出现了一种新的光敏活性DNA生物素试剂，即生物素-聚乙二醇- 当归 素（BPA）。BPA的DNA结合部分是一个活性糖香...
...结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高，信号强，所以最常用。放射性同位素标记探针虽然敏感度高，但...
前述三种探针均是可克隆的，一般情况下，只要有克隆的探针，就不用寡核苷酸探针。在DNA序列未知而必须首先进行克隆以便绘制酶谱和测序时，也常应用克隆。克隆探针一般较寡核苷酸探针特异性强，复杂度也高，从统计学角度而言，较长的序列随机碰撞互补序列的机会较短序列少，克隆探针的另一优点是，可获得较强的杂交信号，因为克隆探针较寡核苷酸探针掺入的可检测标记基因更多。但是，较...
所得到的目的序列或基因的克隆，都要用其核酸序列测定来最后鉴定。已知序列的核酸克隆要经序列测定确证所获得的克隆准确无误；未知序列的核酸克隆要测定序列才能确知其结构、推测其功能，用进一步的研究。因此核酸序列测定是分子克隆中必不可少的鉴定步骤。核酸序列测定的原理和方法在实验教材中有详细的叙述。
基因探针 （probe）就是一段与目的 基因 或 DNA 互补的特异 核苷酸序列 ，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之 转录 而来的 RNA 。 1． 探针 的来源 DNA探针根据其来源有3种：一种来自 基因组 中有关的基因本身，称为 基因组探针 （genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRN...
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