...30或35℃)在2×SSC反应液中,可以根据下列公式计算最适复性温度:TOr =0.51 (G+C%)+47℃。表18-4 DNA—DNA杂交温度的选择范围(2×SSC)DNA中G+C mol%杂交反应温度(℃)TORTsTns...
...质粒中插入HBV全基因组DNA,长3.2kb,载体为PBR322质粒,4.3kb。将质粒DNA用三蒸水稀释成10ng/μl,取20μl放入EP管,100℃变性5min,加入20u HRP标记试剂,混匀,加入戊二醛20μl混匀,37℃10min...
...。每个亲合素分子有生物素结合的4个位点,二者可牢固结合成不可逆的复合物。生物素-亲合素的应用大致有三种方法。①标记亲合素-生物素法(labelled avidin- biotin method,LAB法):将亲合素与标记物(HRP)结合,...
...HCl 含(0.1mol/L甘氨酸)pH7.410min。孵育在2×SSc 10min。2.探针准备35pmol的寡核苷酸(oligo -)探针,3’ 终末标记以地高辛-11–dUTP。3.预杂交和杂交加约300μl预杂交液(配制法见附录)在...
...动物在实验前常常需要作适当的分组,那么就要将其标记使各组加以区别。标记的方法很多,良好的标记方法应满足标号清晰、耐久、简便、适用的要求。常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。(一)颜料涂染这种标记方法在实验室最常使用,也很方便。...
...皮质激素:泛发病例服用小剂量强的松20-30mg /日。局部病损亦用去炎松局部注射。4.限局病损,冷冻治疗。5.避免日光照射。6.局部可用皮质激素软膏,防止软膏等。表15-2 SLE的诊断标准美国风湿病学会标准(1982年修订)中国风湿病...
...。2.3 于每孔中加0.2ml125I标记HBsAg试液,轻拍反应盘,排出气泡,并使珠子全部浸入液体中,盖上新的密封胶纸,置室温结合4小时(或45℃水浴2小时),去除胶纸,按2.2项冲洗。2.4 用纸试管架将珠子从反应盘转移至塑料管中,其...
...的各种限制性内切酶进行酶切和杂交。1974年首次用RFLP作为遗传学分析的方法。1978年简悦威和Dozy等第一次用人体β珠蛋白基因作为探针,同限制酶Hpa Ⅰ酶切的DNA做杂交,发现了DNA的RFLP与镰形细胞贫血之间的关系(表23-4)...
...(一)直接检出病毒核酸1.标本滴加到硝酸纤维素膜上,病毒DNA结合到膜上,在原位进行硷变性处理后,有放射标记的已知病毒DNA片段杂并,两条单股核酸按硷基到补原则结合成双股,经放射自显影,阳性结果出现斑点状杂交信号。含轮状病毒的粪便标本经热...
...3h或过夜。(7)对PBS透析24h,4℃离心去沉淀,半饱和硫酸铵洗沉淀结合物3次,溶于1ml 0.02mol/L pH7.4的PBS中。(8)对PBS充分透析,经测定后分装,贮于-20℃冰箱中保存备用。用过碘酸钠法可以得到很高标记率的...
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