...,其基本操作要点是相同的,如杂交温度在Tm-25℃,杂交孵育时间以过夜(16h左右)为佳。应用寡核苷酸探针在原位杂交组织化学技术中的成功与否主要决定于探针的设计,使有效配对率增加而错配(mismatch)减少。(一)地高辛标记寡核苷酸探针的...
...组织处理及预杂交等步骤与本章 中叙述的放射性同位素标记cRNA探针相同,但由于地高辛标记cRNA探针在原位杂交细胞化学中已愈来愈得到广泛的应用,我们在基本方法中仍较详细的叙述其操作过程。1.组织前处理在组织制片中以冷冻切片(厚10~30μm)...
...原位杂交组化(ISHH)与免疫组织化学(IHC)结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色,这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原,从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。...
...DPX封片。(二)培养细胞的原位杂交细胞化学方法(1)固定:通常将细胞培养在盖玻片或塑料薄膜上,可将盖玻片取出,倾去培养液,用4%多聚甲醛液固定2~4h后,依组织切片处理法进行ISHH实验。也有在4%多聚甲醛室温固定20min后,由低浓度...
...原位杂交组化(ISHH)与免疫组织化学(IHC)结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色,这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原,从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。...
...放射自显影像↑ 增殖期肝细胞核因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点,应用已知碱基序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针(probe),与组织切片或细胞内的待测核酸(RNA或DNA片段)进行杂交,通过标记物的...
...preimplantation)的ISHH诊断。所谓胚前诊断是在受精卵植入子宫内膜前的4~6细胞期,以显微操纵器(micromanipulator)或微型吸管穿破透明带,将分裂球或其中的部分细胞吸出放入培养液内,应用ISHH技术进行性染色体的分析,如有染色体畸形,可...
...核酸分子杂交技术 二、原位杂交组织化学技术的由来及发展 三、原位杂交组织化学技术的基本方法 第二节 cRNA探针在原位杂交组织化学(ISHH)中的应用 一、同位素标记cRNA探针在ISHH中的应用 二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学...
... cRNA探针在原位杂交组织化学(ISHH)中的应用 一、同位素标记cRNA探针在ISHH中的应用 二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 三、地高辛标记cRNA探针的应用 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的...
...近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,...
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