...高血脂症、甚至肿瘤中的一部分,均是当前研究的重点,近期内可望有突破。2.致病病原体的检测 这些外源入侵的基因,一旦阐明其部分核酸序列,就可以设计引物或探针,用PCR、PT-PCR或杂交方法来检测,其范围包括细菌、病毒、原虫及寄生虫、霉菌、立克次体...
...因而特别适合于大量临床标本的基因诊断。目前该方法只对PCR产物进行定性鉴定。彩色PCR(Colorcomplement assay)直译为“着色互补性检测”,是LP-PCR的一种,彩色PCR意译更为明确:它用荧光染料标记引物的5’端。荧光...
...水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的...
...了解急性非淋巴细胞(ANLL)是否也存在上述两种基因重排,采用多重PCR技术检测41例ANLL病人IgH及TCRVγI-Jγ基因重排。 1材料与方法 1.1病例经形态学、组织化学和免疫学确诊的41例ANLL患者,年龄20~63岁,24例,...
...所有实验结果都有成功或失败,实验的失败可能是应该出结果而没有出,我们把它称作假阴性,不该出结果而出了结果我们把它称为假阳性。PCR实验中最常见的问题就是假阴性和假阳性问题。(一)假阴性:出现假阴性结果最常见的原因是:Taq DNA聚合酶...
...探针与扩增了的DNA进行杂交显示和定位,其敏感性可达到显示单个拷贝基因的信号的程度。Bagasra及其同事们利用这一方法,应用32P和生物素标记的核酸探针分别对导致人体免疫缺陷的HIV-1/AIDS病毒DNA的单个拷贝基因经PCR扩增后在外周...
...PCR温度循环至关重要,PCR扩增仪各参数必须准确。自Perkin –Elmer Cetus公司第一台PCR扩增仪问世以来,现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售PCR扩增仪。在短短的几年间,扩增仪经过几代的发展,不断采用新技术,并且...
...和消除错配的引物末端,与复制过程中校正功能有关。三是5’→3’外切酶活力,它能从5’端水解核苷酸,还能经过几个核苷酸起作用,切除错配的核苷酸。1985年Mullis 等发明了PCR方法,以Klenow片段完成β-珠蛋白的PCR后,世界上许多...
...对ApoB基因多态性进行检测、分析的方法很多,如:限制性内切酶的酶谱分析法,PCR直接分析法,PCR产物RFLP分析法,等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交法等等,其中最多用且简单的方法有PCR产物直接分析法和PCR产物RFLP分析法。...
...用于PCR的标准缓冲液见PCR操作范例。于72℃时,反应体系的pH值将下降1个单位,接近于7.2。二价阳离子的存在至关重要,影响PCR的特异性和产量。实验表明,Mg2+优于Mn2+,而Ca2+无任何作用。1.Mg2+浓度Mg2+的最佳浓度...
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