...国内外实验工作者的经验,认为最佳原则应是应用最低探针浓度以达到与靶核苷酸的最大饱和结合度为目的。这和我们在免疫细胞化学试验中选择抗血清的最佳工作浓度的原则一样。探针浓度依其种类和实验需要略有不同,根据笔者的经验及所查阅文献,在原位杂交细胞...
...寡核苷酸探针;从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是,这一技术还处于不断的改进和更新的过程中。一、PCR与原位杂交细胞化学结合法自1988年以来On等科学家相继在研究对导致人类免疫缺陷的HIV-1/AIDS病毒DNA进行细胞内定位,...
...,与其氨基酸序列密切相关,而它的氨基酸序列又是DNA通过mRNA转录控制的。因此检测该DAN/mRNA的分布,可判断组织细胞的功能状态。为在组织细胞水平检测DNA/mRNA等一定碱基序列的核酸存在与否,Gall(1969)等建立了原位杂交...
...原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的...
...中自我复性,提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段,在严格的杂交条件下,可用于检测在序列中单碱基对的错配。因此,寡核苷酸探针的研究,对于提高核酸杂交技术的特异性和敏感性,扩大应用范围有重要意义。常用的寡核苷酸探针有3种:①特定序列...
...,因此可将对应于突变热点区的寡核苷酸探针合成或点加于DNA芯片上,通过一次杂交完成对待测样品多种突变可能性的筛查,实现对多种遗传病的高效快速诊断。国外现已成功地将这一技术用于β-珠蛋白基因的突变检测以诊断地中海贫血,其高准确性及高自动化特性...
...中的应用 三、地高辛标记cRNA探针的应用 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 一、DNA探针的应用 二、寡核苷酸探针的应用 第四节 原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法 一、同位素原位杂交组化与免疫组化PAP法的联合...
... cRNA探针在原位杂交组织化学(ISHH)中的应用 一、同位素标记cRNA探针在ISHH中的应用 二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 三、地高辛标记cRNA探针的应用 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的...
...虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA...
...原位杂交组织化学在染色体铺片的应用主要在三个方面:染色体的基因分配或基因图(Gene assignment)的研究、癌细胞或癌前组织的染色体异常的间期细胞遗传学分析研究和性染色体对胚胎的生前诊断。在依次介绍这些方法的应用以前,我们先简要介绍一个...
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