信号转导过程中往往涉及多种激酶的活化,因而对这些激酶活性的测定可以作为信号转导研究中的一种重要指标。常见激酶活性的测定有PTK、PKC及PI-3K等。均有商品化的试剂盒。检测原理是根据激酶可以催化特定底物发生磷酸化,外源加入 32 γ-ATP,通过分离反应产物后测定放射活性,从标准曲线推算出样品酶的活性。前已提及,PKC从胞质向胞膜的转位是PKC活化的一个重...
正常人体内酶活性较稳定,酶活性改变预示着人体某些器官和组织受损或发生疾病后,某些酶被释放入血、尿或体液内.因此,借助血、尿或体液内酶的活性测定,可以了解或判定某些疾病的发生和发展.
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性,几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达ng甚至pg水平。与放射免疫分析相比,酶免疫测定的优点是标记试剂比较稳定,且无放射性危害。因此,酶免疫测定的应用日新月异,酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。但酶免疫测定在医学检验中的普及应归功于商品试剂盒和自动或半自动检测仪器的问世。酶免疫测定步骤复杂,试剂制备困...
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性,几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达ng甚至pg水平。与放射免疫分析相比,酶免疫测定的优点是标记试剂比较稳定,且无放射性危害。因此,酶免疫测定的应用日新月异,酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。但酶免疫测定在医学检验中的普及应归功于商品试剂盒和自动或半自动检测仪器的问世。酶免疫测定步骤复杂,试剂制备困...
在方法建立的原理确定后,尚需根据其原理来选择合适的条件,以保证所建的方法可靠。下面以亮度法为例介绍其条件选择的主要环节。颜色反应是亮度分析的基础,因此,用作亮度测定的颜色反应至少要具备以下几条:反应有较高的特异性,从而干扰小;反应产生的有色物质 吸光系数 要大,大者灵敏度高;有色产物的离解度要小,小则稳定;此外,还要求有色产物有恒定的组成成分,使产生的颜色稳...
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性,几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达ng甚至pg水平。与放射免疫分析相比,酶免疫测定的优点是标记试剂比较稳定,且无放射性危害。因此,酶免疫测定的应用日新月异,酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。但酶免疫测定在医学检验中的普及应归功于商品试剂盒和自动或半自动检测仪器的问世。酶免疫测定步骤复杂,试剂制备困...
以氰化高铁血红蛋白为底物测定NADH-MetHb还原酶活性,或以二氯酚靛酚为底物测定黄递酶活性,或以细胞色素b5为底物测定b5R活性。需强调指出的是,由于不同遗传变异型的作用机制不同,试管中(高底物浓度下)测定的结果并不能确切地反映在活细胞内(低底物浓度下)催化效率减低的程度。因为,如果酶分子结构的改变使其与底物NADH的亲和力减低(Km值增大),在生理情况...
50年代以前 酶活性 浓度单位的命名混乱,常以方法提出者的姓氏来命名,例如 淀粉酶 的Somogyi单位, 碱性磷酸酶 的King单位等等,定义参差不齐,给临床医师带来很大不便,尤其在建立“连续监测法”测酶后,大量酶应用于临床,此混乱现象更为突出。1963年国际 生化 协会通过广泛讨论,提出一个国际单位定义来表示酶量的多少,即1分钟能转化1微摩尔 底物 (μ...
...斑点-ELISA示意图 应用斑点-ELISA的原理,通过特殊工艺已制备出各种试剂,供临床检验用。一般分三种类型:①将试剂膜粘贴在塑料条片,便于洗涤和观察。②将试剂膜封在小盒内,膜下垫吸水剂,洗涤液通过膜吸入盒内。此即斑点免疫渗滤试验(见第十九章)。③将试剂膜固定在小杠框格中放入特殊的自动分析仪中检测。应用这一系统可做各种蛋白质、激素、药物和抗生素的定量测定。
基因突变 可使个别 酶活性 增高,其 代谢 产物增多从而可引起 疾病 。例如有一类 痛风 (gout)是由于患者体内的 磷酸核糖焦磷酸合成酶 (phosphoribodsylpyrophosphate synthetase,PRPP-syn)结构 变异 ,酶活性可升高3倍,致使 磷酸核糖焦磷酸 (PRPP)的生成大大加快(图4-24),结果由PRPP分解的终...
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