...核酸序列,已广泛应用于临床检验和科学研究。Leary等(1983)用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。Forst等(1985)发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法,使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进...
...核酸序列,已广泛应用于临床检验和科学研究。Leary等(1983)用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。Forst等(1985)发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法,使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进...
...光敏生物素的醋酸盐很易溶于水,与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点:方法简便易行,快速省时,不需昂贵的酶和dUTP等;只需光照,探针稳定,-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RNA,抗体和酶等的标记。在原位分子杂交,斑点杂交和...
...同样应注意放射线防护。非放射性标记有酶标和化学物标记法。酶标方法与免疫测定ELISA方法相似,只是被标记的核酸代替了被标记的抗体,事实上被标记的抗体也称为探针,阅读文献时应加以注意。现有许多商品是生物素(biotin)、地高辛标记的,如生物素...
...靠得近时,才能产生受激发光,因此这种方法具有较好的特异性。(2)吖啶翁酯标记法:吖啶翁酯标记探针与靶核酸杂交后,未杂交的标记探针分子上的吖啶翁酯可以用专门的方法选择性除去,所以杂交探针的化学发光是与靶核酸的量成比例的。该法的缺点是检测的敏感度...
...原位启动标记法(Primed in situ labelling,PRINS),又叫寡核苷酸启动法(Oligonucleotide-priming method)是Koch(1987)首先提出的,其基本原理是将未标记的寡核苷酸探针与细胞或...
...生物素结合,过氧化物酶-抗过氧化物酶显示系统显示病毒DNA在细胞中的定位。生物素标记探针技术目前已被广泛应用,特别是在病毒学和病理学的临床诊断中。这种生物素标记技术又叫酶促生物素标记技术。另一种叫光促生物素标记核酸技术,该技术是用光敏生物素(...
...,其反应过程见图20-3。图20-3 地高辛标记的探针检测酶联免疫反应常用的免疫酶学检测方法有两类:一是Dig –HRP(辣根过氧化物酶)检测体系,以DAB(四氢氯化二氨基联苯胺)/H2O2为底物,结果为棕色;或以4-氯-1-萘酚/H2O2...
...g/μl。显示探针反应步骤如下。(1)用PBS冲洗粘附有切片的载片2×3min。根据情况也可用漂洗法。(2)将载片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇内30min以封闭内源性过氧化物酶。(3)PBS冲洗2×3min,用吸水纸拭干切片周围的水份...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
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