...液中透析过夜。 （2）将四甲基异硫近氰酸罗达明（每毫克IgG加入5～20μg）溶于二甲亚砜（1mg/ml）,取此溶液300μl，一滴一滴加入蛋白质溶液中，同时电磁搅拌。 （3）在室温中搅拌2h，避光。 （4）把结合物移入直径3cm,高30cm大小的Bio –Gel P-6层析柱（用0.01mol/l pH8.0的PBS平衡过），流速为1.5ml/min。 （...
....4PB（含0.1mol/l NaCl）1ml中，溶解后，取出0.5ml，再加入10μlSPDP无水甲醇液（2.65mg/ml）,SPDP/蛋白摩尔比为10，22℃反应5min，过Sephadex G-50(1×17cm),用100mmol/l pH7.4 PBS（含0.1mol/l NaCl）平衡和洗脱。 （2）0.5ml蛋白（2mg/ml）100mmol...
（1）透析除盐：蛋白质溶液内应除去多余的电解质，不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附，因此，标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水（0.005mol/l NaCl , pH7.0）透析。 （2）去除蛋白质中的沉淀：长期低温保存的蛋白质或4 ℃ 较长时间保存的抗体，特别是在浓度高于2mg/...
抗角蛋白抗体 (AKA)，1979年Young等发现RA 血清 中有一种能与鼠 食管 角质层 反应的 抗体 ，并对RA具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。 检测方法 AKA检测方法：取6周龄雄性Wistar 大鼠 食管中下1/3段作为 抗原 ，做...
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
1．HRP标记凝集素法 适用于小量的凝集素标记（Ponder 1983）。 （1）HRP的活化 ①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中（1.25g/50ml）。 ②加50μl含1%氟二硝基苯的无水乙醇溶液，室温轻度搅拌1h。 ③加1ml含0.06mol/L的过碘酸钠的蒸馏水（0.62g/50ml），室...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下： （1）根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 （2）在电磁搅拌下，将蛋白质溶液加入胶体金溶液中（pH已调至PI超过0.5pH），加入蛋白质时应逐滴加入，1mg的蛋白质大约5min加完。 （3）在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白（BSA）使其终浓度为1%，或...
不论使用何种制备方法，要获得合格的标记化合物，都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外，一些标记化合物，经过一定时间的存放后，往往会出现不纯物，而需再纯化。如碘标记生长激素（ 125 --HGH）,在刚标记的第2天，从Sephadex G-100过滤谱上可见，几乎所有的碘化HGH都集中在峰II；保存1个月后，峰II组份减少，峰I和峰III成分明显增加，峰I是...
由于各种检测方法中所用的 抗原性 状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种： （一）沉淀反应 可溶性抗原 与 抗体 结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性 免疫复合物 。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种 抗原抗体反应 称为沉淀反应（precipitation neaction）。 1．环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的 免疫血清 加到直径...
抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似，但又有差异的蛋白质，通称为免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig），按其结构和免疫化学性质的差异，又可分为五类，分别称为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。载脂蛋白抗体以IgG最为稳定。因载脂蛋白的体液中含量不同以及分离纯化的难易的差...
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