...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...translation),利用此反应可在体外对DNA片段进行放射性磷(α-32PdNTP)的标记制成探针(probe),进行核酸的分子杂交实验,是现代分子生物学的一项重要技术(图16-11)。 图16-11 缺刻平移标记DNA探针许多实验证实DNA ...
...底物掺入带有缺口的DNA或RNA,得到生物素标记的核酸探针。这种标记方法称为缺口平移法。用标记在DNA上的生物素与链霉亲合素-酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记物进行检测。缺口平移法标记生物素DNA探针:在硅化Eppendorf管(放入冰浴中)...
...探针。标记方法步骤:(1)取一小离心管(0.5ml)插入冰浴中,加入待标记DNa 1μg/5μl,95℃变性10min,迅速移入盐冰中3min。加入六核苷酸引物2μl,Dig-dNTP标记物2μl和消毒双蒸水10μl、大肠杆菌DNA聚合酶i ...
...加入适量的放射性或生物素标记的NTP,则所合成的RNA可得到高效标记。该方法能有效地控制探针的长度并可提高标记物的利用率。值得一提的是,通过改变外源基因的插入方向或选用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的转录方向,即以哪条DNA链以模板转录RNA...
...标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应(PCR)扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。(...
...获得的DNA已足以开始聚合酶链反应。基因探针用于在一个特定染色体上确定一个特殊基因的位置。当有放射活性的原子加入已被克隆或复制的基因,此克隆或复制的基因则成为一个被标记的探针。这个探针将找出它的DNA镜像节段,并与之结合。放射活性探针能被...
...):1~419.吉昌华.应用特异性双引物法标记DNA探针.第四军医大学学报,1991;12(1):6620.吉昌华.应用聚合酶链反应标记高活性DNA探针.第四军医大学学报,1990;11(4):31621. WangBo –yun(王伯沄)...
...):1~419.吉昌华.应用特异性双引物法标记DNA探针.第四军医大学学报,1991;12(1):6620.吉昌华.应用聚合酶链反应标记高活性DNA探针.第四军医大学学报,1990;11(4):31621. WangBo –yun(王伯沄)...
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