在某些物质活性检测、神经递质共存的研究、临床肿瘤的分型、定性,以及预后的估测等中,ICC显示了巨大的优势,它不仅能与Carbon、荧光色素、同位素追踪标记及其它组织化学方法(例如PAS染色法)结合,显示两种物质的共存,提示组织细胞的功能,而且本身亦可进行双重染色,研究一些抗原物质的共存,这里仅简单介绍ICC双重染色的几种方法。
在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用罗达明标记,可采用以下染色方法: 1.一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。 2.二步法双染色 先用RB200标记的B抗体染色,不必洗去,再用FITC标记的A抗体染色,按间接法进行。 结果:A抗原阳性荧光呈现绿色,B抗原阳性呈...
某些抗原可以用荧光素标记,制成荧光抗原,标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体,特异性较好,敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵,一般很少采用此法。
角膜、结膜上皮损伤或有 溃疡 时,可被荧光素染色,方法是点无菌的1%荧光素液于结膜囊内,然后用生理盐水冲洗,亦可用 玻璃 棒蘸少量药液于结膜囊内,进行观察。此时可见角膜、结膜破损处有嫩绿色着色,上皮完整处不染色。如有 角膜瘘 ,点荧光素后作轻压眼球,可见角膜表面布满黄绿色荧光素,而在瘘管处则有液体流出,状如清泉外流。操作时注意勿污染被检者面部及衣服。由于荧光...
组织切片 指以生物组织为材料,处理为薄片,应用于玻片以适合 显微镜 之观察。此为 组织学 发展的重要工具及方法。常伴随着显微镜技术的发与玻片的制作技术改进而发展。组织切片广泛应用在 生物学 、医学( 病理学 、 传染病学 等)、农学(植物病理学)等领域。 切片的种类 生物学里的 切片 是指将材料以工具(如 刀片 、 切片机 )切成适合以显微镜观察的薄片之手续...
(1)将载有切片的镍网(或金网)在5%的H 2 O 2 液中蚀刻(etch)2~3min。生理盐水冲洗,滤纸吸干。 (2)正常 羊血 清用0.05mol/L Tris盐液(TBS)稀释成1:30,pH7.0,室温5min 。 (3)兔抗血清(第一抗体),内含1%正常 羊血 清,用0.05%mol/l Tris缓冲液稀释,pH7.6,4℃,48h后以Tris缓...
应用于电镜水平的免疫法,可分为包埋前染色和包埋后染色,由于包埋前染色对细胞膜的穿透性差,一般只用于细胞表面的抗原标记,如需穿透细胞膜,则需辅以冻融法或加入Triton X—100、皂素等活性剂,后者会加重细胞超威结构的破坏,因此,现较普遍采用包埋后染色,现分别介绍如下:
经固定组织、应用振动切片机(Vibratome)切35~50μm厚片,或用组织铺片,以漂浮法在反应板上进行下列步骤: (1)正常 羊血 清(1:30PBS稀释),室温孵育30min。 (2)第一抗体(A种动物抗血清),4℃湿盒中48~72h。 (3)羊抗A种动物血清(1:100)室温30min。 (4)A种动物血清PAP复合物(1:100)室温30min。 ...
...素H结合所致。维生素H(以下统称生物素)是一种小分子的维生素,分子量为244,系转氨甲酰基化过程中的辅酶,它与卵白素之间有很强的亲合力,较之抗体对抗原的亲合力要高出100万倍,能够彼此牢固结合而不影响彼此的生物学活性。同时,生物素与卵白素都具有与其它示踪物质如荧光素、铁蛋白和过氧化酶等相结合的能力。免疫细胞化学工作者利用上述特性,建立了卵白素—生物素免疫染色...
标记染色体 :在 肿瘤细胞 内常见到结构异常的 染色体 ,如果一种异常的染色体较多地出现在某种 肿瘤 的细胞内,就称为标记染色体,可分为特异性和非特异性标记染色体两种。如 慢性粒细胞性白血病 中的 费城染色体 即Ph小体。特异性标记染色体是指经常出现于同一种肿瘤内的标记染色体
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