生物素- 补骨脂 素是另一种生物素光敏物质,在长波长紫外线照射下与嘧啶碱基发生光化学反应,加成到DNA中,去除小分子后,得到生物素标记核酸探针。此法可标记单链或双链DNA或RNA,及寡核苷酸。灵敏度与放射性探针相当。标记方法:取DNA或片段0.5μg加50μlTE(pH8.0)缓冲液中,再加入5μlg生物素- 补骨脂 素,溶解后,置365nm紫外光下直接照射...
...反应体积为50μl:40mmol/l Tris HCl pH8.0、8mmol/l MgCl 2 、2mmol/L亚精胺、25mmol/l NaCl, 1mmol/L每一ATP、GTP、GTP,1mmol/L生物素Bio-11-Dutp,500ng模板,45u T 3 RNA聚合酶。混合,37℃反应1h。加入10%SDS终止反应。凝胶过滤分离标记RNA探针。
(一)基本原理 应用DNA探针缺口翻译(nick translation)方法,通过碱基配对以一条DNA链为模板,将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。显示方法有二种:一种是用HRP显示,类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法,利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平...
此法是在亚硫酸盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基,使生物素结合到DNA分子上而制成生物素化DNA探针。此法优点是采用通用试剂和技术,检出敏感。Vicied 等人指出DNA和RNA中胞嘧啶N-4位置在亚硫酸氢盐存在下可用乙二胺连接臂修饰,此过程也可能介导C-6位的磺酸盐组分。在合适的条件下,可有3%~4%的碱基被修饰。新鲜配制亚硫酸氢钠-乙...
(一)光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针,使其最终浓度为0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦卤素灯下,距离光源20cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素,再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针,将其溶于适量的灭菌双蒸水,用紫外分光...
日前获悉,由江南大学生物工程学院与浙江鑫富生化股份有限公司共同完成的、达到国际领先水平的“微生物酶法拆分制备D-泛解酸内酯及用于生产D-泛酸钙与D-泛醇”项目实施产业化后,其原材料消耗、能源消耗、废液、废渣排放、生产成本均有大幅度降低,改善了操作环境,提高了产品品质与产品安全性,使利用化学拆分法的世界最大的两家D-泛酸钙生产公司被迫让出一定市场空间,使我国D...
泛酸钙片 拼音名:Fansuangai Pian 英文名:Calcium Pantothenate Tablets 书页号:2000年版二部-318 本品含 泛酸钙 (C18H32CaN2O10) 应为标示量的93.0%~107.0 %。 【性状】 本品为白色片。 鉴别 (1) 取本品的细粉适量(约相当于泛酸钙50mg),加氢氧化钠 试液 5ml, 振摇,滤...
【中文名称】 泛酸钙 ;本多生酸钙;右旋泛酸钙;N-(2,4- 二羟基 -3,3- 二甲基 丁 酰基 )-β- 氨基丙酸 钙 【英文名称】calcium pantothenate 【结构或分子式】 【相对分子量或原子量】476.54 【熔点(℃)】159~160(分解) 【 毒性 LD50(mg/kg)】 大鼠 经口10000。 【性状】 白色粉末,无臭、味...
一、基本原理
以HBV DNA为例。取HBv DNA质粒0.5μg,随机引物(Pharmacia)2μg,用TE(pH8.0)补足体积至10μl;100℃,热变性5min,骤冷10min。加10×缓冲液(500mmol/l Tris –HCl (Ph6.6),100mmol/L MgCl 2 ,10mmol/L β巯基乙醇),BSa 500μg/ml 5μl,5mmol/
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