用 荧光素 、 同位素 或 酶标记 抗体 或 抗原 ,用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的 标记物 与抗原或抗体 化学 连接之后不改变后者的 免疫 特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。 1. 免疫荧光技术 免疫荧光技术(immunofluorescencetechni)是用化学方法使荧光素标记的抗体(或抗原)与组织或 细胞 ...
(一)基本原理 应用DNA探针缺口翻译(nick translation)方法,通过碱基配对以一条DNA链为模板,将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。显示方法有二种:一种是用HRP显示,类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法,利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平...
1.单面法 以不同直径的金粒分别标记两种不同的抗体,以间接法先染第一种抗体,洗净后再染第二抗体。 2.双面法 以不同直径的金粒标记的抗体于镍网的两面分另进行免疫染色。本法的优点是可防止两种金标记的抗体的相互干扰,又可防止第一次应用的一抗与其相应的抗原相结合,占据了空间,第二次应用的抗体没有适合的空间使之与相应的抗原相结合。 3.异种动物抗原—抗体染色法 如一...
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的方法,是标记免疫技术的一种。近年来标记免疫技术飞速发展,应用不同标记物,根据不同原理、不同技术建立起来的检测方法层出不穷,而方法的创建者往往给同类的方法以不同的名称。因此确知某一方法属于哪一类型,对该方法的正确理解有着重要意义。本节先叙述各种标记免疫技术的要点,然后介绍酶免疫技术的分类,这样可以对酶免疫技术和其他非...
恶性淋巴瘤 总的可分为非何杰金 淋巴瘤 (NHL)与何杰金氏病两大部分。NHL的免疫功能分类繁多。总体上各类型的瘤细胞的免疫细胞化学标记与相应的正常细胞标记相一致。但是由于瘤细胞的基因有变异,分化不正常,其抗原性也发生变化。因此瘤细胞比相应正常细胞的表达要弱或丧失。在此不分型描述,而从应用角度分为下列三方面进行讨论:
在电镜水平应用较为广泛,因该法具有特异性中、灵敏度高、方法简便和背景染色淡等优点。蛋白A的免疫特异性在第五章 已作了介绍,PAg复合物制备方法简便,作为第二抗体,无种属特异性,可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用,蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性,又能保持高度的稳定性...
...7.9,在pH7.4时通过离子键能与抗体IgG(pH5.8~7.3)结合而不影响抗体活性,在此条件下,Seno'对Hale'胶体铁进行了抗体标记,并成功用于免疫细胞化学染色(Seno,et al.1989),抗体标记时,用0.1mol/L碳酸钾将胶体的pH调至7.4按每毫升脱体铁0.2~1mg的蛋白量,将IgG在电磁搅拌下逐滴加入到胶体铁,搅拌5min后,通...
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
(一)cRNA探针的同位素标记 1.标记液(转录标记) 2.转录缓冲液 ※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。 3.标记终止液 4.标记探针水解液 先用dH 2 O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。 5.探针水解时间 注:L O -探针初始长度(kb) L f -探针的终长度(kb) K-0.11kb/min 6.探针水解终止...
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