用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果 1．免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100～10-7系列稀释的抗原，斑点直径0.25cm, 空气中干燥，80℃多聚甲醛蒸气固定1h，然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥抗联接胶体铁标记物的间接法染色，普鲁士蓝呈色观察。一步法所难检测到的抗原量为10-２～10-３μg,间接法 敏感性至少增...
... 碱基配对 规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸 探针 。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。 放射性同位素 标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高，信号强，所以最常用。放射性...
1．巯基化藻红蛋白（phycoerthrin PE）的制备，600μl的15.5mg/ml盐酸巯醇亚胺（iminothiolane hydrochloride）加到1.2ml的3.6mg/ml的PE中，和1.2ml PB、pH6.8 混合，装入透析袋置入50mmol/l pH6.8 PB中透析，4℃过夜，再换用pH7.5PB透析6h。每个PE分子中可结合8个...
1．HRP标记凝集素法 适用于小量的凝集素标记（Ponder 1983）。 （1）HRP的活化 ①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中（1.25g/50ml）。 ②加50μl含1%氟二硝基苯的无水乙醇溶液，室温轻度搅拌1h。 ③加1ml含0.06mol/L的过碘酸钠的蒸馏水（0.62g/50ml），室...
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、细菌毒素、酶、补体等皆为良好的可溶抗原。但因这些蛋白质多为复杂的蛋白组分，免疫前需进行纯化。蛋白质纯化方法在生物化学技术中已有详述，本章主要介绍免疫化学纯化方法。 （一）组织和细胞粗抗原的制备 免疫原多来源于只类及动物的组织或细胞，这些材料在取得可溶性蛋白质之前，必须先进行处理，以适合于进一步纯化。 1．组织细胞抗原的制备所用组织必须...
免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了...
...晶，在室温或4℃冰箱内使之出现铁蛋白结晶。此铁蛋白结晶以2%硫酸铵（pH5.58）溶解后，如上述再用硫酸镉使之结晶。反复溶解，结晶六次，达到纯化。纯化后铁蛋白在半饱和的硫酸溶液内可保存1～2年。用时以蒸馏水透析除盐后即可应用，应用前可以用负染色法在电镜下观察，了解铁蛋白的完整性和纯度。 商品制备的铁蛋白是用2%硫酸铵溶液稀释的1%～2%溶液（pH5.85）。...
当病原微生物侵入机体时会产生相应的 抗体 。病原微生物入侵 细胞 时需要依赖病原体自身表达的特定 分子 与细胞上的 受体 结合，才能 感染 细胞，并进一步 扩增 。 中和抗体 是B 淋巴细胞 产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的 抗原 结合，从而阻止该病原微生物黏附 靶细胞 受体，防止侵入细胞。 中和抗体是由 适应性免疫 应答 细胞分泌 的一种可溶性 蛋白...
...链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高，信号强，所以最常用。放射性同位素标...
（一）抗体的荧光素标记 用于标记的抗体，要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。作为标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的...
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