...影响,在抗原或抗体的检测中显示出高度的特异性。5.敏感性高由于金颗粒的电子密度很大特别适合透射电镜及扫描电镜,因此,免疫金银法用于电镜,其检测抗原或抗体率远远超过酶反应物,从而大大改进了免疫细胞化学技术在电镜水平上的分辨率。光镜下金颗粒经过...
...进行原位杂交。显示方法有二种:一种是用HRP显示,类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法,利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平的厚片原位杂交免疫细胞化学染色,其步骤与第二十章 叙述的原位杂交免疫细胞化学基本方法相同,只是为了减少细胞...
...标记的过氧化物酶—抗过氧化物酶技术(即PAP法,见第四章 )。二、电镜标本制备方法免疫酶细胞化学技术可用于包埋前和包埋后染色,但以前者应用较多。1.单层细胞培养物免疫酶染色法(1)用4%多聚甲醛(在0.05mol/l 磷酸缓冲液中,pH...
...显示方法有二种:一种是用HRP显示,类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法,利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平的厚片原位杂交免疫细胞化学染色,其步骤与第二十章 叙述的原位杂交免疫细胞化学基本方法相同,只是为了减少细胞微细结构的损伤...
...至-20℃,切出3~5μm厚的冰冻切片附贴于载玻片上,至少需切10张以上备用。继而使用荧光素标记之各种抗体进行免疫荧光染色(具体操作步骤参见第三章 )。所使用之荧光标记抗体包括羊或兔抗人各种免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD...
...仔细观察比较胶体金的颜色,可以粗略估计制得的金颗粒的大小。当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的粒径。结制备的胶体金最好作电镜观察,并选一些代表性的作显微摄影,可以比较精确地测定胶体金的平均粒径。胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间保存,...
...80μl),湿盒内孵育1~2h(20~25℃);免疫电镜用标本,4℃过夜。(10)PBS充分冲洗(3次×2min),以去除切片上非特异吸附的抗体。应用不同的第一抗体或同时进行对照标本染色时,需分别冲洗,以防相互污染。(11)经0.05...
...几方面:一、组织固定与取材在这方面的要求是即要保存良好的细胞超威结构,又要注意保持组织的抗原性。因此,选用固定剂不宜过强。常用的免疫电镜固定剂有多聚甲醛—戊二醛混合液和过碘酸-赖氨酸—多聚甲醛液(Periodate—Lysine –...
...金免疫技术的特点是以胶体金作为标记物。这一技术在70年代初期由Faulk和Taylor始创,最初用于免疫电镜技术。迄今为止,金标记仍主要用于免疫组织化学中。在免疫测定中,金标记常与膜载体配合,形成特定的测定模式,典型的如斑点免疫渗滤试验和...
...尤其是免疫电镜的包埋前染色。结合免疫酶及不同大小胶体金标记抗体,还可用于抗的双标记及多标记。非特异性背景染色是免疫组化染色过程中经常遇到的问题。组织中的内源性过氧化酶活性及色素常会干扰免疫过氧化酶染色;而胶体金非特异性吸附组织是构成IGSS...
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