（一）模板 核酸 PCR可以以 DNA 或 RNA 为模板进行核酸的体外 扩增 。不过RNA的扩增首先 逆转录 成cDNA后才能进行PCR循环。不同来源的核酸 标本 必须经处理后才能用于PCR的扩增，处理不当或处理过程中DNA掉失都会导致PCR扩增失败。 采集标本 方法不当，未能获得所要检测的靶DNA都会导致出现 假阴性 。但是如果待扩增标本中模板DNA浓度...
锚定PCR（AnchoredPCR, A-PCR）主要用于分析具有可变末端的DNA序列，Loh等用A-PCR对人外周血淋巴细胞T细胞受体α-链的mRNA的多变性进行了分析。先合成cDNA，并用末端脱氧核苷酸转移酶在其3’-可变区末端加上一个PolyG尾巴。Loh等恒定区与可变区连接部位设一个引物，另一个引物是一个具5’-polyG尾巴的引物。带有PolyG尾...
（一）特异性高：首次报导的PCR所用的 DNA 聚合酶 是 大肠杆菌 的DNAPolymeraseI的Klenow大片段，其 酶活性 在90℃会变性 失活 ，需每次PCR循环都要重新加入Klenow大片段，同时 引物 是在37℃延伸（聚合）易产生模板—引物之间的 碱基 错配、致特异性较差，1988年Saiki等从 温泉 水中分离到的水生嗜热 杆菌 中提取的热...
在将Taq DNA 聚合酶 引入PCR反应，并使之达到自动化之后，PCR反应已变得十分的简单了。但是PCR样品的采集及制备却并非同样简单，而且，许多PCR的失败都归因于 标本 的制备不当。用于PCR的标本必须经适当处理后才能使用，因为标本中的许多杂质能抑制Taq DNA聚合酶的活性。另外，处理标本可使待 扩增 DNA暴露，能与 引物 复性 。关于PCR标本制...
在聚丙烯管中可以对多种含膜板材料进行PCR，而在显微玻片上用组织细胞涂片或切片直接进行DNA扩增的方法就称为玻片PCR（Slide-PCR）。 图22-3 锚定PCR原理示意图 先将细胞涂片或呈单层细胞，然后用甲醇/醋酸（3：1，V/V）、Carnoy溶液、无水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5～15min。用蒸馏水冲洗，干燥，直接使用或保存于-20℃备用。在玻片...
不对称PCR的基本原理是采用不等量的一对引物产生大量的单链DNA（ss-DNA）。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物；其最佳比例一般为1：50～1：100，关键是限制引物的绝对量。限制性引物太多太少，均不利于制备ss-DNA。也可用普通PCR制备靶DNA双链DNA（ds-DNA），再以ds-DNA为模板，只用其中一种过量引物进行单引物PCR制备ss-...
用多对引物同时扩增几条DNA片段的方法称为复合PCR。这一方法最初是由Chanberlain 等检测人的基因发展而来。Bej等随之发展了对环境样品中不同属细菌相关基因序列同时PCR扩增的检测方法。两种不同的军团菌（legionella）基因，一为特异嗜肺L基因（mip），另一种为L-5SrRNA基因，通过引物摇摆（staggered）添加进行复合PCR。首先...
聚合酶链反应 （polymerasechain reaction简称PCR）又称无细胞 分子克隆 系统或特异性 DNA 序列体外 引物 定向酶促 扩增 法，是 基因扩增 技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA 分子 的分析和检测能力，能检测单分子DNA或对每10万个 细胞 中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方法立即...
（一）模板核酸 PCR可以以DNA或RNA为模板进行核酸的体外扩增。不过RNA的扩增首先逆转录成cDNA后才能进行PCR循环。不同来源的核酸标本必须经处理后才能用于PCR的扩增，处理不当或处理过程中DNA掉失都会导致PCR扩增失败。采集标本方法不当，未能获得所要检测的靶DNA都会导致出现假阴性。但是如果待扩增标本中模板DNA浓度太高也会导致扩增失败。 （二）...
加端PCR（add-PCR）是使扩增产物的5’-末端加一段DNA顺序的PCR。设计加端PCR的引物时，除与模板配对的那一部分外再加上若干碱基，这样使扩增产物的末端加上额外一段DNA，如加上一个限制酶的识别顺序或特定功能的DNA片段。Stoflet等报道在结构基因前加上噬菌体T 7 的启动子，当然也可用于DNA片段的末端标记或引入特定的点突变。末端可加碱基的数...
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