...用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果1.免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100~10-7系列稀释的抗原,斑点直径0.25cm, 空气中干燥,80℃多聚甲醛蒸气固定1h,然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥...
...用FITC标记,B抗原的抗体用罗达明标记,可采用以下染色方法:1.一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。2.二步法双染色 先用RB200标记的B抗体染色,不必洗去,再用FITC标记的A抗体染色,按间接法...
...用于软组织肿瘤可在石蜡切片表达的抗体已有多种,请参见表12-1。表12-1 软组织细胞可用的标记抗体抗原名称标记细胞(1)角蛋白(Keratin)上皮与肌上皮细胞(2)波纹蛋(Vimentin)间叶分化细胞、内皮细胞(3)结蛋白(...
...方法为:先将待标记的蛋白质溶液装入透析袋中,置于含FITC的0.01mol/LpH9.4碳酸盐缓冲液中反应过夜,以后再对PBS透析法去除游离色素。低速离心,取上清。标记完成后,还应对标记抗体进一步纯化以去除未结合的游离荧光素和过多结合荧光素...
...不论使用何种制备方法,要获得合格的标记化合物,都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外,一些标记化合物,经过一定时间的存放后,往往会出现不纯物,而需再纯化。如碘标记生长激素(125--HGH),在刚标记的第2天,从Sephadex G-...
...金属类标记物的免疫标记法同切片免疫染色,即将标记物与抗体相结合,通过直接或间接法显示抗原部位。胶体金可与蛋白A相结合后与IgG分子中的Fc 段相结合。哪与卵白素(a-vidin)相结合可与结合抗体的生物素(biotin)反应。免疫金银...
...适用于标记体积较大,蛋白含量较高的抗体溶液。优点是标记时间短,荧光素用量少。但本法的影响因素多,若操作不当会引起较台强的非特异性荧光染色。透析法适用于标记样品量少,蛋白含量低的抗体溶液。此法标记比较均匀,非特异染色也较低。方法为:先将待标记...
...Eagle液培养及上述条件孵育,48h细胞不仅贴附于玻片上并已长成单细胞层。取出玻片用丙酮固定15min,自然干燥后待用,或保存于-20℃或4℃中。表15-3 各种抗核抗体及临床意义抗体名别名临床意义抗Sm抗体 SLE标记抗体,阳性率15~28%...
...现已被新检测方法所代替。四、用标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原,用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量...
...上述各种方法制备酶标抗体时,除产生酶标抗体外,还有未标记的抗体蛋白、游离酶、酶二聚体及偶联剂等。这些均可使酶标抗体的敏感性下降,故酶标抗体须经纯化后应用。现简介几种常用的纯化方法。1.多聚体的分离实验中,不同的试剂形成的多聚体的数量各异,...
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