...大学西京医院皮肤科刘玲硕士等在完成的一项国家自然科学基金资助课题中,采用细胞内PCR扩增抗体基因的方法,成功构建一库容量为3×106白癜风的噬菌体抗体库。该抗体库的建立,为进一步研究自身抗体在白癜风发生发展过程中的作用及其治疗提供了崭新的思路。 据介绍,白癜风是一种常见的皮肤色素脱失性疾病。近年来有研究表明,白癜风与自身免疫密切相关,其患者体内存在抗黑素细胞...
噬菌体 (phage)是 感染 细菌 的一类 病毒 ,有的噬菌体 基因组 较大,加入λ噬菌和T噬菌体等;有的则较小,如M13、f1、fd噬菌体等。用感染 大肠杆菌 的λ噬菌体改造成的载体应用最为广泛。 λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链 DNA 分子 ,组装在 头部 蛋白质 外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过 尾管 将基因...
噬菌体是能感染细菌、放线菌、真菌、螺旋体的病毒。噬菌体分布广泛,凡是有细菌存在的场所,就可能有相应噬菌体的存在。噬菌体有严格的宿主特异性,只寄居于易感宿主菌体内。 在电镜下噬菌体有三种外形, 蝌蚪 形、微球形和线形。大多数噬菌体呈蜊蚪形,由头部和尾部两部分组成(图4-1)。但也有无尾的噬菌体。较大的噬菌体头部的形状常为六棱柱体,头部含有核酸,外围绕一层蛋白质...
噬菌体是寄生于细菌的病毒,有宿主细胞的特异性,即某种菌的噬菌体仅能在该种菌内复制。在敏感菌中增殖并裂解细菌的噬菌体称为毒性噬菌体。另有一类称为温和噬菌体。这类噬菌体感染细菌后,有两种后果,即或裂解细菌或形成溶原状态(Lysogeny)。温和噬菌体裂解细菌的过程与毒性噬菌体相同,而形成溶原状态则为噬菌体的基因组整合于细菌的染色体上,并随细菌的繁殖传至子代。带有...
噬菌体λ是最主要的一种载体。自从1974年以来,已用野生型λ改造和构建出一系列噬菌体载体。 噬菌体λ是温和噬菌体。基因组是长约50kb的双链DNA分子。在噬菌体λ颗粒中,DNA是线状双链分子带有单链的互补末端。末端长12个核苷酸,这称为粘性末端,简写COS。当噬菌体感染宿主细胞后,双链DNA分子通过COS而成环状。在感染早期,环状DNA分子进行转录。在此期间...
最常用的单链噬菌体载体是M13和它的改建噬菌体。M13是丝状噬菌体,有长约6500个核苷酸的闭环DNA基因组。M13附着在大肠杆菌的F性菌毛上,所以它们只能感染雄性细菌,即F’或Hfr细菌。当噬菌体进入细菌细胞后,单链的噬菌体DNA转变成双链复制型(RF)。从细胞中分离的RF可用作克隆双链DNA的载体。当每个细菌细胞里 积聚 了200到300份RF型拷贝时,...
野生型噬菌体λDNA全长约50kb,上有65种限制酶酶切点,除ApaⅠ、NaeⅠ、NarⅠ、NheⅠ、Sna BⅠ、XbaⅠ和XhoⅠ等7种限制酶各有一个切点外,其余都多于2个。有些酶切点在λ增殖所必需的基因区域内。因此,噬菌体λ必须经过改造才能用作载体。现在用的λ载体大都除去了某种限制酶的酶切点。因此,作为载体的噬菌体λ都短于野生型。 噬菌体λ载体有两种类...
噬菌体能展示各种分子的功能域或抗原、抗体的相应配体结构。只要有抗体,便可以从噬菌体展示肽库中筛选出与之相结合的特异性抗原表位。现在人们已经开始使用多克隆抗体来筛选噬菌体肽库来寻找某些疾病的诊断抗原。江苏省 血吸虫病 防治研究所科技部对噬菌体展示模拟抗原表位的血吸虫病诊断价值进行了研究。 方法:将目标噬菌体感染大肠杆菌er2537进行扩增,用聚乙二醇-8000...
噬菌体(phage)是感染细菌的一类病毒,有的噬菌体基因组较大,加入λ噬菌和T噬菌体等;有的则较小,如M13、f1、fd噬菌体等。用感染大肠杆菌的λ噬菌体改造成的载体应用最为广泛。 λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,而将其蛋白质外...
...M9基本培养基平板上的划线培养,于37℃温育24~36h。 (2)批量制备冻存的感受态细胞的方法,同大肠杆菌感受态细胞的制备。 2.用M13噬菌体转染感受态细胞 (1)用2×YT或SOB培养液于37℃持续地振摇,将用于铺平板的细胞(JM101或TG1等)培养过夜。 (2)从-70℃以下冰箱中取出一份冻存的JM101或TGI感受态细菌,于室温慢慢融化,立即放在...
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