在pH 2.0条件下,细胞内游离的酸性基团对胶体铁有亲和力,再与酸性亚铁氰化钾作用,胞质内的酸性粘多糖所在部位可发生普鲁士蓝反应,被显示为蓝色。
可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。
1.组织加工 有人提出用冰冻切片进行CEA免疫细胞化学染色。由于非特异性荧光和需要一定设备条件,有人改用福尔马林固定和胰酶消化的方法。从我们的体会看,福尔马林固定后的切片CEA的部分抗原决定簇被遮盖,阳性结果显着受到影响。但是用冷酒精固定后的组织切片,CEA的阳性率明显升高,而且结果仍很清晰。goldenbery等同时进行CEA酶标记组织,而福尔马林固定的组...
1.组织固定和加工 用冰冻组织切片可直接进行溶菌酶免疫细胞化学研究。用冷酒精固定,4%福尔马林缓冲液或1.5%戊二醛固定均能进行免疫细胞化学染色。但浸蜡时温度不能超过60 ℃ ,载玻片应涂薄层 明胶 以防组织切片脱落。载片后,组织切片应放在50~56 ℃ 的烤箱中干燥但不能放在底层,因烤箱底层温度不均匀。组织切片应避免接触含油类的手和容器。组织块应放在4℃密...
...亲合力要高出100万倍,能够彼此牢固结合而不影响彼此的生物学活性。同时,生物素与卵白素都具有与其它示踪物质如荧光素、铁蛋白和过氧化酶等相结合的能力。免疫细胞化学工作者利用上述特性,建立了卵白素—生物素免疫染色系统。由于维生素H习惯上称为生物素,为便于理解,现在译名上统称卵白素为抗生物素或亲合素。所以卵白素—生物素免疫染色系统又称为抗生物素—生物素免疫染色法。
SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记,应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术,后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA在PAP法中可代替桥抗体。 1.SPA—HRP用于间接法的操作步骤 (1)切片经脱蜡后用0.5%H2O2—纯甲醇液处理5min以抑制内源性过氧化物酶活性。 (2)用Tris盐酸缓冲液(...
是将 免疫学 基本原理与 细胞化学 技术相结合所建立起来的新技术,根据 抗原 与 抗体 特异性结合的特点,检测细胞内某种 多肽 、 蛋白质 及膜 表面抗原 和 受体 等大分子物质的存在与分布。 肽 类与蛋白质种类繁多,均具有 抗原性 ,当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内,则产生与该抗原相应的 特异性抗体 ( 免疫球蛋白 );将抗体从 血清...
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展...
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展...
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